酶学基础的教案.pptxVIP

酶学基础的教案;2.1 酶 的 结 构;酶的高级结构是其发挥活性的基础;传统的氨基酸序列的测定;α-Helix 模型的构建;抹香鲸肌红蛋白的三级结构;模体（Motif） ;结构域(domain) ;酶的一级结构;酶分子的空间结构是维持酶活性中心所必需的构象。酶和其他蛋白质一样，二级结构单元主要是α-螺旋，β-折叠、β-转角和无规卷曲。在酶的二级结构中，结构单元在结合底物过程中，常发生位移或转变。 酶分子（或亚基）的三级结构是球状外观。由非极性氨基酸，如苯丙氨酸、亮氨酸、丙氨酸等在分子内部形成疏水核心，而表面多为亲水性氨基酸残基所占据。除少数单体酶外，大多数酶是由多个亚基组成的寡聚体。亚基间主要依靠疏水作用连接，范德华力、盐键、氢键等也具有一定作用。亚基数目以双亚基和四亚基居多。在多数情况下，每个亚基有一个活性部位，也有不少例子说明，一个完整的活性部位，是由一个以上亚基共同组成的。;酶的空间结构研究方法;X－射线衍射法和核磁共振法;实验证据：在8mol/L尿素存在下，用巯基乙醇处理天然RNase,其二硫键全部断裂，肽链松散，活性全部丧失，但当用透析法除去尿素、巯基乙醇后，RNase活力全部恢复，而且复原后产物其理化性质与天然RNase完全相同；然而在随机情况下，8个HS—形成4个—S—S时，应有105种不同方式，但在复原过程中，RNase肽链却只选择了其中一种方式（即与天然构象完全相同），这说明RNase的一级结构决定了其特定的天然构象。;几个溶菌酶的一级结构;几个溶菌酶的三级结构;全酶和酶的活性中心;活性中心的特点;活性中心包括催化基团（部位）和底物结合基团（部位） 。;酶的催化基团; 底物结合基团是指酶活性中心直接与其底物结合的残基基团，大多是非极性基团。底物结合基团的存在是酶分子正确识别专一性底物的基础，因为只有与酶活性中心结构（包括大小、形状、电荷等）相适应的底物才能与酶结合。底物结合基团可能不只一个，如羧肽酶A在催化多肽C－端肽链水解时，酶活性中心中的Tyr248、Arg145、Glu270及Zn2+等基团能识别底物并与之结合;催化基团和结合基团并不是各自独立的，而是相互联系的整体。催化效率的高低很大程度上取决于底物结合的位置是否合适，只有结合基团正确地结合底物。提供催化基团发挥作用的最优构象，才能有效发挥催化作用。也就是说，构成底物结合位点的氨基酸残基的空间构象，必须既适合于结合底物，也适合催化底物的反应。 除了活性中心的催化基团和结合基团之外，一些结构基团对维持酶分子的完整和特定的构象起重要作用，也是酶的必需基团。;7种氨基酸残基出现在活性中心的频率最高，它们是Ser、His、Cys、Tyr、Asp、Glu和Lys，其次是Arg、Asn、Gln。这些残基一般是带有极性侧链基团。; 活性中心的氨基酸残基，在结构上都具有一些特殊的侧链基团。如Cys的-SH基、Ser的-OH基、His的咪唑基等。 ??作为结构残基，如两个疏基之间形成-S-S-键，用以维持酶分子特定构象。 亲核催化：如3-磷酸甘油醛脱氢酶活性中心的-SH对底物的醛基进行的亲核攻击作用。 结合底物：疏基酶与底物结合有两种方式，较普遍的方式是酶的-SH与金属离子相联，再通过金属离子与底物结合，如细胞色素氧化酶通过Cu2+作用，亮氨酸氨肽酶通过Mn2+作用。另一种方式是形成共价中间复合物，即以硫脂键形成酰化酶。 结合辅基；细胞色素c中，血红素与酶蛋白中Cys14、Cys12的-SH形成硫醚键而结合。;酶活性部位的研究方法; 化学修饰法;在底物或抑制剂存在下进行化学修饰时，由于它们保护着蛋白质的活性部位基团，使这些基团不能与试剂作用。然后将过量的底物或抑制剂除去，所得到的部分修饰的蛋白质再与含同位素标记的同样试剂作用，结果只有原来被底物或抑制剂保护的基团是带放射性同位素标记的。用这一方法可直接得到蛋白质发挥功能作用的必需基团。 ;回顾 1。几种结构 2。一级机构 3。二级结构 4。三级结构;亲和标记;具有不同反应基团的亲和标记试剂;具有不同反应基团的亲和标记试剂;酶蛋白是含有许多解离基团的两性电解质，pH改变必然影响到解离基团的解离状态，处于活性中心基团的解离状态的改变必然影响到酶的活性。因此，通过研究酶活性与pH关系，可以推测到与催化直接相关的某些基团的pK值，进而推测这些基团的作用。;X-射线晶体衍射法;;木瓜蛋白酶 Papain;胃蛋白酶 （pepsin）;金属蛋白酶;定点突变;酶的活性部位模型假说;诱导契合模型假说 该假说认为，酶与底物结合时，结合力促使酶和底物分别发生一些构象的变化，更有利于催化反应的发生。酶的构象变化可使结合更紧密，并使催化基团处于更有利于催化的位置上。底物形变造成的应力状态则可能使发生反应的键变弱，降低反应的活化能使反应速度增加。