高效液相色谱分离技术.pptx

生物技术及应用专业教学资源库4.6 高效液相色谱分离技术4.色谱分离技术 高效液相色谱法及特点 1 高效液相色谱法与经典液相色谱法的区别 2 高效液相色谱法的分类 3 高效液相色谱分离方法的选择依据 4 高效液相色谱仪的结构 5 高效液相色谱分离技术高效液相色谱法的应用 6 高效液相色谱法及特点 高效液相色谱法（high pressure Liquid chromatography，HPLC）是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。 高效液相色谱法的特点：1.高压2.高效　　 3.高灵敏度4.应用范围广5.分析速度快、载液流速快高效液相色谱法及特点 高效液相色谱法与经典液相色谱法的区别高效液相色谱法经典液相色谱法高压，40～50Mpa填料颗粒小，2～50μm柱效高，40000～60000块/m 分析速度快 色谱柱可重复多次使用 能在线检测常压或减压 填料颗粒大柱效低分析速度慢色谱柱只用一次不能在线检测 高效液相色谱法的分类按分离原理的不同，高效液相色谱法可分为：1.分配色谱：疏水作用2.吸附色谱：吸附能、氢键3.离子交换色谱：库伦力4.亲和色谱：特异亲和力5.凝胶色谱：溶质分子大小6.离子排斥色谱：Donnan膜平衡7.离子对色谱：疏水作用8.离子抑制色谱：疏水作用9.配位体交换色谱：配合作用10.手性色谱：立体效应 高效液相色谱分离方法的选择依据样品种类水溶性HPLC分离方法的选择相对分子质量大于2000溶于水空间排阻色谱，水为流动相不溶于水空间排阻色谱，非水为流动相相对分子质量小于2000溶于水的离子酸性化合物用阳离子交换色谱碱性化合物用阴离子交换色谱溶于水，不解离反相液-液色谱空间排阻色谱，水为流动相不溶于水同系物用液-液色谱，凝胶色谱异构体多官能团用液固色谱分子大小差别大用空间排斥色谱 高效液相色谱仪的结构 高效液相色谱仪由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统及数据处理系统五个部分组成。 高效液相色谱仪的结构 1.输液系统组成：贮液瓶、脱气装置、高压输液泵、过滤器、梯度洗脱装置等。用途：储存流动相，并将其以高压形式连续不断地送入液路系统。贮液瓶高压输液泵 高效液相色谱仪的结构 2.进样系统包括手动进样器（六通阀）或自动进样器。通常要求具有重复性好，死体积小，保证中心进样，进样时对色谱柱系统流量波动要小，便于实现自动化等性能。进样过程引起色谱峰展宽的主要因素有进样体积、进样时间、样品浓度、进样器死体积，进样技术等。六通阀 高效液相色谱仪的结构 3.分离系统即色谱柱，内部填充有固定相，是色谱分离系统的核心部分。色谱柱管为内部抛光的不锈钢柱管或塑料柱管，高效液相色谱柱几乎都是直形。高性能的色谱柱与固定相本身性能、柱结构、装填和使用技术有关。为保证柱温的稳定，一般将色谱柱置于柱温箱中。色谱柱柱温箱 高效液相色谱仪的结构 4.检测系统用于检测被分离的各组分。根据组分特点，选择适宜的检测器。常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器、示差折光检测器、质谱检测器等，其中紫外检测器是HPLC应用最普遍的检测器。紫外检测器 高效液相色谱仪的结构 5.数据处理系统由硬件计算机和软件色谱工作站组成。用于数据采集、泵及阀控制、数据处理、定性定量分析、数据存储、报告输出等。数据处理系统 高效液相色谱仪的结构 高效液相色谱法的应用类型主要分离机理主要分析对象或应用领域分配色谱疏水作用有机化合物分离、分析、制备吸附色谱吸附能、氢键异构体分离、制备离子交换色谱库伦力无机阴离子与阳离子，环境与食品工程分析亲和色谱特异亲和力蛋白质、酶、抗体分离，生物工程和医药分析凝胶色谱溶质分子大小大分子量样品分离测定，如蛋白质和人造聚合物的分离离子排斥色谱Donnan膜平衡有机离子、弱电解质离子对色谱疏水作用离子性物质离子抑制色谱疏水作用有机弱酸、弱碱配位体交换色谱配合作用氨基酸、几何异构体手性色谱立体效应手性异构体分离 谢谢观看生物技术及应用专业教学资源库