食品毒理学实验广东海洋大学.pptxVIP

食品毒理学实验广东海洋大学第1页/共31页第2页/共31页 课程简介： 本实验课程主要面向“食品质量与安全”等专业本科生，是食品类专业课程《食品毒理学》的实践环节，共有学时数16学时，教学内容包括“小鼠口服急性毒性试验”等。实验教学中主要为技能型实验环节，以提高学生应用毒理学基本实验测试食品及药品毒性的动手操作应用能力。第3页/共31页目录实验1毒理学实验动物基本操作技术训练实验2小鼠口服急性毒性试验实验3小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验实验4小鼠精子畸形试验第4页/共31页实验1毒理学实验动物基本操作技术训练【实验目的】1、了解常用实验动物的种类、特性；2、掌握大鼠、小鼠、家兔的捉拿与固定技术；3、学会大、小鼠性别的辨认；4、掌握大、小鼠灌胃染毒技术，家兔被皮技术；5、熟悉大、小鼠生物材料采集方法；6、掌握大鼠断头处死、小鼠脱颈椎处死方法；7、对大、小鼠进行常规解剖，辨认各脏器及正常解剖位置 第5页/共31页【实验内容与方法 】（一）实验动物的捕捉固定第6页/共31页第7页/共31页【实验内容与方法 】（二）实验动物性别鉴定第8页/共31页（三）染毒技术第9页/共31页第10页/共31页（四）动物的麻醉与外死 （1）颈椎脱臼法 （2）断头法 （3）击打法 （4）急性大出血法 （5）药物致死法 第11页/共31页实验2 小鼠口服急性毒性试验 【实验目的】1、学习急性毒性试验的试验设计原则，2、学会经口灌胃技术、随机分组方法，3、掌握主要的LD50计算方法和急性毒性分级标准。 第12页/共31页【实验原理】选择健康的试验动物，根据体重按随机分组的方法，依据LD50计算的设计原则将动物分成数个染毒组。一次或24h内多次给予受试物后，了解动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，观察受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死量（LD50），并根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。 第13页/共31页【实验内容】健康小鼠或大鼠的选择，性别的辨认。称重、编号和随机分组方法。受试化学物溶液的配制。小鼠和大鼠经口灌胃技术。毒性体征的观察、LD50计算和毒性分级。 第14页/共31页LD50计算根据受试物的种类由指导教师事先确定采用何种方法(改进寇氏法，霍恩法等)进行计算，并在试验前设计剂量分组和每组动物数。选择适宜的方法求出LD50及95％的可信限范围。如毒性反应存在性别差异，应分别求出不同性别动物的LD50值。 第15页/共31页结果评定 根据实验动物中毒体征、死亡时间和特征、LD50，接受试物种类，分别参照相应的经口急性毒性分级标准进行评定，判断该受试物的毒性大小及毒性特征。 第16页/共31页实验3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 【实验目的】1、了解骨髓细胞微核实验及毒理学意义2、掌握实验原理其实验方法。第17页/共31页【实验原理】外来化学物干扰细胞的有丝分裂或使染色体发生断裂损伤，使细胞在有丝分裂后期受损的染色体或其片断不能及时进入细胞核，而留在细胞质中，形成大小为主核1/20 至1/5 的微核。骨髓嗜多染红细胞为刚刚成熟排出主核的细胞，细胞中如果有微核形成则会很清晰观察到。检测的遗传学终点：染色体分离改变或完整性改变。毒理学意义：由于微核是骨髓细胞染色体断裂后产生，所以可用来检测化学物是否具有致突变作用。第18页/共31页【实验方法与步骤】（一） 实验动物的处理 （二） 微核分析片准备 （三） 固定（四） 染色 第19页/共31页（五） 结果观察与计算 先于低倍镜下选择细胞分布均匀、染色均匀，细胞无损区域，再在油镜下计算500个嗜多染细胞的微核率。 微核出现率％＝微核出现个数/细胞数×100 第20页/共31页正常对照第21页/共31页实验示范第22页/共31页（六）结果评价将各组微核率进行X2检验，判断其影响程度，还可进行剂量反应关系评价 第23页/共31页实验4小鼠精子畸形试验 【实验目的】 1、 掌握小鼠精子畸形试验方法：包括动物选择、剂量分组、取材、制片、染色、观察整个过程；2、 熟悉畸形精子形成的原因：控制精子形态的基因受损、精子发生过程受影响、能量提供不足、精子膜受损等。第24页/共31页二、实验器材、试剂 （一）器材生物显微镜、解剖剪、镊子、表面皿、离心管、小漏斗、吸管、滴管、载玻片、擦镜纸等。（二）试剂1、 1%伊红染色液：称取伊红1g溶于100ml蒸馏水中。2、 生理盐水、甲醇（A.R）第25页/共31页【实验内容与步骤】1、剂量设计 2、染毒 3、制片 4、 固定 5、 染色 6、观察与计数 第26页/共31页第27页/共31页第28页/共31页第29页/共31页结果统计与分析 第30页/共31页第31页/共31页感谢观看！