实验三微生物染色观察.pptVIP

一 油镜的使用 学习油镜的使用技术及维护的基本知识 初步认识细菌的基本形态 实验目的 现在是1页\一共有23页\编辑于星期三 油镜使用的原理 油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 浸没油与玻璃的折射率相近 很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。 现在是2页\一共有23页\编辑于星期三 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。 显微镜保养和使用中的注意事项 现在是3页\一共有23页\编辑于星期三 操作步骤 现场演示 1.低倍镜观察：粗调、细调。依次再进行中倍、高倍观察 2.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。 3.换片：另换新片，必须从第1条开始操作。 4.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。注意：油镜使用完毕后一定要用二甲苯擦拭镜头 用油镜观察细菌三形永久装片。 现在是4页\一共有23页\编辑于星期三 ? 简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。 ? 常用碱性染料进行简单染色，因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。 实验原理 二 细菌的简单染色 现在是5页\一共有23页\编辑于星期三 ? 常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。 ? 当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。 实验原理 (continued) 细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。 现在是6页\一共有23页\编辑于星期三 1、菌种 枯草芽孢杆菌1D培养物 2、染色剂 吕氏碱性美蓝染液 齐氏石碳酸复红染液 实验材料 现在是7页\一共有23页\编辑于星期三 涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检 操作步骤 四、实验步骤 无菌操作 现在是8页\一共有23页\编辑于星期三 菌悬液 涂片 干燥 滴加无菌水 固定 取菌苔 涂片 操作步骤（continued） 现在是9页\一共有23页\编辑于星期三 1、涂片 取两块载玻片，各滴一小滴（或用接种环沾取）生理盐水（或无菌水）于玻片中央，用接种环以无菌操作分别从枯草杆菌和金黄色葡萄球菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混合并涂成薄膜。 如用菌悬液或液体培养物，可用接种环挑取1-2环直接涂于载玻片上。 Notes: 1） 载玻片要洁净无油迹 2）滴生理盐水和取菌不宜过多 3）涂片要涂抹均匀，不宜过厚。 操作步骤（continued） 现在是10页\一共有23页\编辑于星期三 3、固定 固定的目的： 1）使细胞质凝固，以固定细胞形态； 2）并使菌体牢固地附着在载玻片上。 固定方法： 热固定：涂面朝上，通过火焰数次 注意：温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜， 否则会改变甚至破坏细胞形态 操作步骤（continued） 2、干燥 室温自然干燥 现在是11页\一共有23页\编辑于星期三 4、染色 ◇ 将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。 ◇ 美蓝染色1-2min；石碳酸复红染色约1min。 操作步骤（continued） 5、水洗 倒去染液，用洗瓶（内装自来水）轻轻冲洗，直至涂片上流下来的水无色为止；染色废液收集在废液缸中。 Note: 水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下，水流不宜过急，以免涂片薄膜脱落。 现在是12页\一共有23页\编辑于星期三 7、镜检 细菌个体微小，一般使用油