植物细胞减数分裂.pdf

0 0 实验一 植物细胞减数分裂 一、实验目的 (1)掌握制备植物细胞减数分裂玻片标本的技术和方法。 (2) 了解高等植物细胞减数分裂过程，观察染色体的动态变化。 二、实验原理 分裂是生物在形成性细胞过程中的一种特殊方式的细胞分裂，在此过程中先由有性组织 (花药或胚珠) 中的某些细胞分化为二倍性的小孢子母细胞或大孢子母细胞，这些细胞连续进 行两次细胞分裂即减数第一次分裂和减数第二次分裂。结果一个小孢子母细胞形成4 个小孢 子．一个大孢子母细胞形成一个大孢子，它们都只具有单倍的染色体。 减数分裂在遗传上具有重要意义。性母细胞(2n)经过减数分裂形成染色体数目减半的配 子(n) 。经过受精作用．雌雄配子融合为合子，染色体数目恢复2n 。这样在物种延续的过程 中确保了染色体数目的恒定，从而使物种在遗传上具有相对的稳定性。另外在减数分裂过程 中包含有同源染色体的配对、交换、分离和非同源染色体的自由组合，这些都是遗传学分 离．自由组合和连锁互换规律的细胞学基础。在这些基本规律的作用之下，导致了各种遗传 重组的发生，而遗传重组又是生物变异的重要源泉。 在适当的时候采集植物的花蕾制备染色体标本就可在显微镜 下观察到植物细胞的减数分裂。 三、实验材料 蚕豆(Vicia ．faba，2n=12)花药、玉米(Zea mays ，2n=20)花药、小麦(Triticum spp ．2n=42) 花药、大葱(Allium fistulosum 2n=16)花药、桔(Citrus sinensis 2n=18)花药、洋葱(Allium cepa 2n =16)花药、番茄(Lycopersicum escuSentum 2n=24)花药。 四、实验器具和药品 1．器具 显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、大培养皿、酒精灯、吸水纸。 2 ．药品 无水乙醇、醋酸洋红染液、石蜡、二甲苯、固定液( 甲醇：冰醋酸：3 ：1)、 加拿大树胶、正丁醇或叔丁醇。 五、实验步骤 1．取材 在一朵花的减数分裂的全过程中能观察染色体的时间是很短的，一般在终变 期，中期I ，后期I 。因此，选取刚现蕾的花序是观察花粉母细胞减数分裂的关键步骤,要注 意花蕾的形态和大小，适时选材。 (1)玉米 北方的玉米5 月份取材，时间以上午8:30 为好，夏玉米一般在7 月份取材， 以上午7:00 一8:00 为好,在玉米雌穗未抽出前的7— 10 天手摸植株上部(喇叭口下部)有松软 感觉，表明雄花序即将抽出。用刀在顶叶近喇叭口处纵向划一刀，切口长 10 一 15cm，剥出 雄花序，顶端花药长3—5mm，花药尚未变黄时取材。 (2)蚕豆：从现蕾开始，上午 10:00— 11:00 可选取2—3mm 大小的花莆或一小段花序。 蚕豆开花的次序是由下而上，由外而内。 (3)小麦：在植株开始挑旗，旗叶与下一叶片的叶耳间距约为3 一4Cm,花药长度大致在 1.5—2.0mm,黄绿色时取材最好。如花药为绿色时取材则为时过早,花药为黄色，则已过时。 上午7:00 一8:00 为取材最佳时间。 (4)大葱：在北方地里越冬的大葱，第二年春季3—4 月长出花序，待花序长出，颜色呈 绿色，花蕾长度在3～4mm ，花药长度为1— 1.1mm 时取材。上午9:00 一 10:00 为最佳取材 时机。 (5)洋葱：4—5 月长出花序，同上。 (6)番茄：5—9 月均可取材，时间以上午8:30—9:30 为好，花蕾以3—4mm 为宜(番茄花 期持续时间长，可随时取材) 。 (7)桔：桔花吐蕾时,在上午8:00 一 12:00 取3—9mm 的花蕾为宜。 2 ．固定 通常制作幼小花药压片时，可不经固定，直接放在醋酸洋红染液中，同时进 行固定和染色，但是先经固定的材料容易着色、分色及便于保存。固定时将采集的材料置于 卡诺氏固定液 12—24 小时，若不及时制片，可将固定后的材料用70% 的乙醇冲洗直至闻不 到醋酸味为止，后放入70% 乙醇中存于4 ℃冰箱内，可随时取用。 3 ．染色制片 用蒸馏水将从固定液或从70 ％酒精保存液中取出的花蕾冲洗数遍，然后 剥开花雷，放在载玻片上，用解剖针及虹膜刀将花药横切成 3—4 段(或纵切) ，加一滴醋酸 洋红染液于材料上，用解剖针轻压花药使花粉母细胞从切口出来，静止染色5— 10 分钟，除 去花药壁。加上盖玻片使染液刚好布满载玻片与