生化技术光学检测技术.pptxVIP

生化技术光学检测技术;一 分光光度检测;1 样品溶液的配备 （1）对各种光有选择性吸收特性的物质 （2）本身没有颜色的物质，转变为有色的物质溶液 2 样品的检测 选择好入射光的波长，空白液调零，测定。 ;3 待测物质的定性分析 （1）将样品溶液在一定条件下（pH、温度、缓冲液等）测得的吸收光谱与物质的标准吸收光谱相对照，推断样品是什么。 （2）根据样品吸收光谱中峰顶与峰谷吸光度之比值，与相当条件下资料所载的比值比较，推断样品是什么。 如 ATP: OD280/OD260=0.85, OD250/ OD260=0.90 AMP: OD250/OD260=0.85, OD280/OD260=0.22 (3)将分光光度检测与层析或电泳分离技术相配合，综合判断。 ;4 待测物质的定量分析 （1）标准曲线法 注意：对于存在有干扰物质的样品要进行校正。 （2）Lambert-Beer E=KCL, K-消光系数;二 旋光检测技术;溶剂确定后， α ＝[α]tλ LC/100 α － 旋光度 L －溶液厚度（分米）[α]tλ －比旋光度，通常采用[α]20D L －溶液厚度（分米） C－溶液浓度，100mL溶液中所含物质的克数。 根据物质的[α]20D 和实际测出的α，可计算得到C= α× 100/ ([α]tλ L) ;操作要点： （1）样品液的配制