色谱分析在药物分析中的运用.pptxVIP

色谱分析在药物分析中的运用第1页/共27页 2一、概述色谱学已发展成为一个独立的学科医药领域是色谱应用的重要领域之一液相色谱目前在常规分析仪器中的排列第2页/共27页 3色谱学已发展成为一个独立的学科色谱作为分离分析学科，已有近一个世纪的发展过程。进入20世纪以来，科学技术有了飞速发展，色谱学已发展成为一个独立学科，形成了薄层色谱、气相色谱、液相色谱、离子色谱、超临界流体色谱、亲合色谱、疏水色谱、毛细管电泳和电色谱等许多分支。各种色谱仪与质谱，红外核磁等技术联用仪器已成为令人瞩目的高新技术产品。第3页/共27页 4医药领域是色谱应用的重要领域之一在药物分析中，利用色谱分析方法显得更为重要，尤其是高效液相色谱法（HPLC）是目前药物分析中最常用的分析手段。它主要用于复杂成分、混合物的分离，即可用来作药物的定性、定量及杂质检查。由于高效液相色谱法分析样品的范围不受沸点、热稳定性、相对分子质量大小及有机物与无机物的限制，使其应用范围极广。一般说来，只要能将样品制成溶液，就可分析。且分离速度快，灵敏度高，色谱柱可反复使用，可选择的流动相比气相色谱法多。流出组分不被破坏，且容易收集，可在室温下操作，绝大部分药物均可用高效液相色谱法来作。 第4页/共27页 5液相色谱目前在常规分析仪器中的排列在2000年版一、二部药典中，用高效液相色谱法测定的品种比1995年版药典成倍地增加，2005年版一、二部药典又增加几倍。而高效液相色谱法在几种仪器分析方法中，其分析数量的排列为第二，因其分离效率高，又能准确地反映所测成分的真实含量。中国药典应用高效液相色谱法的情况，目前仅次于美国药典，而优于英国药典和日本药局方。第5页/共27页 6二、共同探讨高效液相色谱在实际操作中的部分问题高效液相色谱方法的建立色谱分离类型的选择溶剂的选择溶剂纯化溶剂的脱气样品溶剂的选择检测器的选择系统适应性试验无参比标准的纯度评价HPLC在药物分析中的应用范围第6页/共27页 7高效液相色谱方法的建立应用HPLC对样品进行分离、分析，主要根据样品的性质，选择合适的分离类型及所用的色谱柱和流动相、检测器等。（一）样品的性质样品中待测组分的分子量大小、化学结构、溶解性等化学、物理性质决定着色谱分离类型的选择。第7页/共27页 8色谱分离类型的选择高效液相色谱的各种方法有其各自的特点和应用范围，应根据分离分析的目的，样品的性质和含量、现有的设备条件等选择合适的方法。通常分离类型应根据样品的性质（如相对分子质量的大小，化学结构，溶解性及极性等）来选择，并根据此条件选择色谱柱和流动相。第8页/共27页 9溶剂的选择在高效液相色谱分析中，流动相的种类、配比，对色谱分离效果影响很大，可供选择的固定相填料种类较少。因此，流动相的选择显得自关重要。（1）溶剂纯度要高 （2）不能引起柱效损失或保留特性变化 （3）常用固定相与流动相的选择 （4）溶剂系统的选择常用（5）缓冲系统及缓冲溶液的处理 第9页/共27页 10溶剂纯化在HPLC分离测定中，溶剂的纯度是很关键的。溶剂足够纯才不至于产生问题，对溶剂纯度的要求依应用情况而定。第10页/共27页 11溶剂的脱气液相色谱仪的检测器常被溶剂中的气泡干扰，气泡的形成是由于被空气饱和的溶剂从高压流向低压，如柱出口，这些气泡形成干扰检测器光学道路的折射表面。因此，限制气泡和伴随的噪音的常用办法是在用前从溶剂中除去气泡。常用的脱气方法有真空泵脱气法和煮沸脱气法。1．真空泵脱气 2．煮沸脱气法3．溶剂的滤过第11页/共27页 12样品溶剂的选择样品的溶剂应对样品溶解性大，且对样品稳定并与检测器相匹配，最好与流动相相同，这样可允许大量的进样量，但待测物的洗脱不应受影响，当样品溶剂与流动相不同时，则会出现样品溶剂的峰。第12页/共27页 13第13页/共27页 14缓冲溶剂的注意事项色谱柱使用的流动相pH值范围为2.5～7.5为宜。酸性太强会使键合的烷基脱落，碱性太强会使硅胶溶解，通常用缓冲液维持一定的pH值。缓冲液浓度范围为0.005～0.5mol/L，尽量用稀溶液为好，在用水和有机溶剂系统中，应注意盐的存在会改变溶剂的可混合性，在色谱分离过程中，绝不能发生相的分离和盐的沉淀。在HPLC中，最常用的缓冲溶液是醋酸盐和磷酸盐缓冲液。第14页/共27页 15检测器的选择HPLC检测中，当样品有紫外吸收时，常选用紫外检测器，在药物分析文献中，用紫外检测器的占95%以上，使用时要注意溶剂的使用波长，即溶剂的极限波长必须低于检测波长。若使用荧光检测器或电化学检测器，可使灵敏度提高2～3个数量级，但不是所有化合物都有荧光，无荧光的物质可经衍生化作用形成荧光的化合物。电化学检测适用于有氧化还原性的药物。第15页/共27页 16系统适应性试验当选用HPLC方法后，不同操作