农业农村部公告第423号-10-2021CN.docx

ICS 65.020.01 CCS B 04 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 农业农村部公告第423号一10—2021 转基因植物及其产品成分检测 转基因成分定量检测结果不确定度 评定与表示 Detection of genetically modified plants and derived products— Guidance on Measurement Uncertainty for GMO Testing Results 2021-05-07 发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 农业农村部公告第423号—10—2021 前 言 本文件按照 GB/T1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：农业农村部科技发展中心、中国计量科学研究院、中国农业科学院生物技术研究所。 本文件主要起草人：高运华、张秀杰、李亮、李夏莹、金芜军、刘卫晓、王迪、梅英婷。 工 农业农村部公告第423号— 10-2021 转基因植物及其产品成分检测 转基因成分定量检测结果不确定度评定与表示 1 范围 本文件规定了转基因产品核酸成分定量检测结果不确定度评定的方法与结果表示。 本文件适用于实验室对转基因成分定量检测结果的测量不确定度评估，亦适用于标准物质研制等相 关领域。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。 农业部1485号公告—4—2010 转基因植物及其产品成分检测 DNA 提取和纯化 农业部2259号公告—5—2015 转基因植物及其产品成分检测 实时荧光定量 PCR 方法制定指南 农业农村部公告第323号—21—2020 转基因植物及其产品成分检测 数字PCR 方法制定指南 JJF 1059.1 测量不确定度评定与表示 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 转化体 transformant(event) 利用基因工程技术获得的具有特定基因组结构并稳定遗传的转基因生物。 3.2 数字 PCR digital PCR 将原始PCR 反应体系进行分割，进而对所有小的反应体系进行扩增，通过阳性率和泊松分布计算获 得样品中靶序列拷贝数或拷贝数浓度。 注：本文件数字 PCR 包括芯片式及微滴式两种。 3.3 实时荧光定量 PCR real-time quantitative PCR 通过实时监测 PCR 反应中的荧光信号强度，实现对起始模板定量分析的一种技术。 3.4 测量不确定度 measurement uncertainty 表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数。 3.5 转基因植物标准物质 genetically modified plant reference material 具有足够均匀和稳定的特性，用于转基因植物及产品核酸(蛋白质)成分测量程序校准、确认与质量控 制的物质，包括基体标准物质、基因组 DNA 标准物质、质粒 DNA 标准物质和蛋白质标准物质。 3.6 转基因成分 ingredients of genetically modified plant 转基因植物及产品核酸与蛋白质成分，本文件主要指核酸成分，用质量百分比或拷贝数百分比表示。 4 测量不确定度评估模型 4.1 转基因成分含量测量模型 2 农业农村部公告第423号—10—2021 测量待测样本中外源基因与内标准基因的拷贝数浓度或质量浓度，测量模型见公式(1)。按公式(1) 计算测试样本中的转基因成分含量。 ( 1) 式中： c —— 测试样品中的转基因成分含量，单位为百分号(%); A—— 测试样品中外源基因的拷贝数浓度或质量浓度； B—— 测试样品中内标准基因的拷贝数浓度或质量浓度。 4.2 实时荧光定量 PCR 法测量模型 以系列标准物质扩增的Ct 值为 Y 轴 ，DNA 拷贝数浓度或质量浓度c 的对数为X 轴，经线性拟合得 到外源基因标准曲线和内标准基因标准曲线线性方程，测量模型见公式(2)。利用公式(2)计算待测样本 外源基因和内标准基因的拷贝数浓度或质量浓度。 Ct=-a×logc+b ( 2) 式中： Ct——荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数； a ——标准曲线的斜率； c ——标准梯度样品中DNA 的拷贝数浓度或质量浓度； b