NY_T 3853-2021CN 猪殃殃对乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程.docx

ICS 65.100 CCS B 17 NY 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 NY/T 3853-2021 猪殃殃对乙酰乳酸合成酶抑制剂类 除草剂靶标抗性检测技术规程 Tech nical code of practice for detection the target-site resistance of Galium spurium Linn. to acetolactate synthase inhibiting herbicides 2021-05-07 发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I NY/T 3853—2021 前 言 本文件按照GB/T1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口， 本文件起草单位：中国农业科学院植物保护研究所。 本文件主要起草人：崔海兰、李香菊、陈景超、李政、彭立存、郭小桐。 1 NY/T 3853—2021 猪殃殃对乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程 1 范围 本文件规定了猪殃殃(Galium spurium Linn.)[异名 Galium aparine Linn. var. tenerum Gren. et (Godr.)Rebb.] 对乙酰乳酸合成酶(acetolactate synthase,ALS)抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程 的基本要求以及注意事项。 本文件适用于猪殃殃对乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂产生靶标抗性的有关检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。 NY/T 1667-2008 农药登记管理术语 NY/T 1859.4 农药抗性风险评估 第4部分：乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂抗性风险评估 NY/T 3285-2018 播娘蒿对乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程 3 术语和定义 上述引用文件中界定的术语和定义适用于本文件。 4 检测程序 4.1 材料培养 选择无猪殃殃种子、无除草剂残留的农田地表土，混合20%～30%的草炭土，混合均匀后装入直径不 小于10cm 的培养钵；待测种群及敏感对照种子用0.05%～0.1%的赤霉素溶液浸泡12 h～24 h后冲洗 干净(或其他打破休眠处理),均匀撒播在土壤表面，覆土约1cm, 采用盆钵底部渗灌方式补充水分，土壤 相对湿度保持在60%～70%;置于25℃:15℃(D:N), 光周期12 h:12 h(L:D)条件下培养。待猪殃 殃长至2叶期，间苗，每盆保留长势一致的10株。 4.2 生物测定 待植株长至3叶期，用待测除草剂(ALS 抑制剂类除草剂)进行茎叶喷雾处理，药剂处理至少设置5 个剂量，每个剂量不少于4次重复，每个重复10株。施药21 d 后，调查每个处理的存活植株数、地上部分 鲜重或干重，按公式(1)计算杂草株防效、鲜重或干重抑制率。 ( 1) 式中： Y — 株防效、鲜重或干重抑制率，单位为百分号(%); M?- 除草剂有效剂量X ga.i./hm2处理后存活植株数、地上部分鲜重或干重的数值，单位为株或 克(g); Mo——对照总株数、地上部分鲜重或干重的数值，单位为株或克(g)。 以杂草株防效、鲜重或干重抑制率为指标，按公式(2)计算生长抑制中量。 ( 2) 式中： Y — 株防效、鲜重或干重抑制率，单位为百分号(%); 2 NY/T 3853—2021 C ——Y 值下限，单位为百分号(%); D .—Y 值上限，单位为百分号(%); X -- 除草剂有效剂量的数值，单位为克每公顷(ga.i./hm); GR -— 生长抑制中量的数值，单位为克每公顷(ga.i./hm2); b — 斜率。 按公式(3)计算抗药性倍数RI。 式中： …………………………………………… (3) RI — 抗药性倍数； GR 抗药性种群生长抑制中量的数值，单位为克每公顷(ga.i./hm2); GRias 敏感性种群生长抑制中量的数值，单位为克每公顷(ga.i./hm2)。 4.3 靶标基因检测 4.3.1 DNA 提取 取杂草幼嫩叶片，约200mg, 采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB) 法或