DB64 995_2014  香石竹组织培养技术规程.docx

ICS 65.020.20 B 05 宁 夏 DB64 回 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 64/T 995-2014 香石竹组织培养技术规程 2 0 1 4 - 0 9 - 2 5 发 布 2014-09-25实施 宁夏回族自治区质量技术监督局 发 布 I DB64/ T 995—2014 前 言 本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009 《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的要求。 本标准由宁夏回族自治区林业厅提出并归口。 本标准主要起草单位：宁夏大学、中国农科院蔬菜花卉研究所、宁夏周景世荣进出口公司。 本标准主要起草人：张黎、刘春、刘静、钱丽娟、唐渊、彭佳佳、王小军、刘佳琦、李娜、党春娇。 DB64/ T 995—2014 香石竹组织培养技术规程 1 范围 本标准规定了香石竹组织培养的术语和定义、生产及技术流程、炼苗、移栽。 本标准适用于香石竹试管苗工厂化生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 628-2011 化学试剂硼酸 GB/T 647-2011 化学试剂硝酸钾 GB/T 659-2011 化学试剂硝酸铵 GB/T 664-2011 化学试剂七水合硫酸亚铁(硫酸亚铁) GB/T 665-2007 化学试剂五水合硫酸铜(Ⅱ)(硫酸铜) GB/T 666-2011 化学试剂七水合硫酸锌(硫酸锌) GB/T 671-1998 化学试剂硫酸镁 GB/T 1274-2011 化学试剂磷酸二氢钾 GB/T 1270-1996 化学试剂六水合氯化钴(氯化钴) GB/T 1272-2007 化学试剂碘化钾 GB/T 1401-1998 化学试剂乙二胺四乙酸二钠 GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 15899-1995 化学试剂一水合硫酸锰(硫酸锰) GB 19489 实验室生物安全通用要求 GB/T 22278-2008 良好实验室规范原则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 植物组织培养 在无菌条件下，创造植物生长最适宜环境条件，采用人工配制的营养基对离体器官、组织、细胞、 原生质体等进行培养，最后形成完整植株的过程。 3.2 外植体 DB64/ T 995—2014 用于离体培养的初始材料。 3.3 初代培养 又称诱导培养，指最初的外植体在无菌的条件下进行培养产生愈伤组织、不定芽的过程。 3.4 继代培养 将初代培养获得的培养物转移到新的培养基上继续培养的过程。 3.5 玻璃化 试管苗不断进行扩繁时，培养物的嫩茎、叶片呈半透明、水渍状的现象。 4 香石竹组织培养技术 4.1 实验室要求 香石竹组织培养实验室包括：洗涤室、准备室、接种室、培养室，同时配备完善的水、电、 暖供 应系统。根据实验操作程序排列实验室，接种室和培养室设在与外界环境隔离性好的区域，准备室与接 种室相邻，洗涤室远离接种室、培养室、准备室。实验室应符合GB/T22278-2008和GB19489的要求。 4.2 主要仪器及设备 4.2.1 洗涤室：水槽、药品柜、冰箱等。 4.2.2 准备室：高压蒸汽灭菌锅、烘干箱、超净水仪、实验台等。 4.2.3 无菌接种室：超净工作台、紫外灯等。 4.2.4 培养室：培养架、紫外灯及控温、控湿、控时设备等。 4.3 培养基及其配制 4.3.1 母液的配制 香石竹组织培养以MS培养基为基本培养基，所用药品均符合GB/T659-2011、GB/T647-2011、 GB/T671- 1998 、GB/T1274- 1993 、GB/T666- 1993 、GB/T15899- 1995 、GB/T628- 1993 、GB/T1272-2007 、 GB/T665-2007、GB/T1270-1996、GB/T664-2011、GB/T1401-1998的规定。配制好的母液分别贴上标签， 注明日期、配制倍数。母液贮存在2℃~4℃的冰箱中。 4.3.2 植物生长调节剂配制 萘乙酸 (NAA)、 吲哚丁酸 (IBA) 先用少量95%乙醇溶解，然后加水定容。6-苄氨基嘌呤(6-BA)、 6-糠基氨基嘌呤 (KT) 先溶于少量1mol/L的盐酸中，再加水定容。所用水应符合GB/T6682-2008的要求。 4.3.3 培养基配制 3 DB64/ T 995—2014 香石竹MS培养基所需蔗糖的浓度35g/L, 琼脂浓度5.5g～ 6.5g/L。初代培养基