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真菌的实验诊断任第1页/共76页 2真菌感染的危险因素：中心静脉插管 尿道插管广谱抗生素气管插管腹部外科肠胃外营养营养不良住院时间感染之前定殖第2页/共76页 3医学重要的酵母菌分类Segal B, Bow EJ, Menichetti F: Infect Dis Clin N Am 2002;16:935-64 条件致病的酵母菌 念珠菌属 非念珠菌属白念珠菌 非白念珠菌热带念珠菌近平滑念珠菌光滑念珠菌克柔念珠菌季也蒙念珠菌葡萄牙念珠菌 隐球菌属新型隐球菌 毛孢子菌属 白吉利毛孢子菌头状毛孢子菌 酵母属 酿酒酵母 红酵母属第3页/共76页 4 霉菌 曲霉菌属 非曲霉菌属 烟曲霉非烟曲霉 黄曲霉黑曲霉土曲霉 镰刀霉 茄病镰刀霉 尖孢镰刀霉 赛多孢属 尖端赛多孢 多育赛多孢 接合菌 根霉属 毛霉属 根毛霉属 梨头霉属 小克银汉霉属 暗色孢霉 链格孢霉属 万氏霉属 双极菌属 弯孢属医学重要的霉菌分类Segal B, Bow EJ, Menichetti F: Infect Dis Clin N Am 2002;16:935-64第4页/共76页 5诊断方法影像学组织病理学/细胞学培养血清学分子生物学方法： Platelia Aspergillus ELISA Fungitell assay PCR（unavailable）传统的方法第5页/共76页 第6页/共76页 7真菌病实验室诊断主要内容准确、快速检出真菌病原体真菌镜检真菌培养组织病理生理生化血清学方法分子生物学第7页/共76页 8真菌感染的诊断直接涂片真菌培养组织病理＋真菌培养是“金标准”第8页/共76页 9有意义的真菌培养标本非经口痰标本非插管尿标本血液或其他无菌体液(胆汁、胸腹水、脑脊液）第9页/共76页 10直接镜检的浮载液和染色剂KOH-10~20%-皮肤标本Gram stain-真菌均为阳性Calcofluor white-荧光染色India-ink-墨汁染色LPCB-乳酸酚棉蓝Immunofluorescence-免疫荧光第10页/共76页 11直接镜检对痰、窦道排泄物及气管冲洗液等标本直接镜检可以看到透明分支的菌丝、脓血或痰太粘稠用10％KOH处理后再进行镜检如果曲霉菌寄生与空气相通的器官中，镜检甚至可以看到曲霉头菌丝有隔，呈二叉型，45℃ 分枝。第11页/共76页 12菌丝和孢子第12页/共76页 13直接镜检——酵母细胞第13页/共76页 14隐球菌病—直接镜检（墨汁染色）第14页/共76页 15有意义的涂片结果机体内部标本如血液、腹水、CSF、脓肿穿刺液等新鲜尿液见到大量菌丝及孢子口腔、阴道、支气管灌洗液见到酵母样菌应作培养确定第15页/共76页 16多细胞真菌形 态sporehypha第16页/共76页 17真菌培养第17页/共76页 18真菌培养检查目的—提高病原体检出的阳性率，确定致病菌的种类。意义— —发现肯定的致病原如新生隐球菌时，诊断即可确立。 —分离出条件致病菌如白念珠菌或烟曲霉，应结合临床情况进行判断。 —无菌部位如血液或脑脊液中分离出条件致病菌常提示肯定的感染，但对来自于脓、痰或尿的标本则应谨慎解释结果。但任何一株培养物都不应轻易视为污染菌。 需结合直接镜检的结果，强调直接镜检与培养检查相结合的重要性。强调临床医师与实验室检验人员之间的相互联系。第18页/共76页 19092第19页/共76页 20区分酵母样或霉样菌落第20页/共76页 21Aspergillus fumigatus - Colonial Morphology, Sabouraud葡萄糖琼脂培养基烟曲霉菌第21页/共76页 22Aspergillus fumigatus - Microscopic Morphology, 100x Lactophenol cotton blue (单列) 分生孢子头、分生孢子梗、顶囊、瓶梗、分生孢子第22页/共76页 23Aspergillus flavus - 在Sabouraud葡萄糖琼脂黄曲霉菌生长快黄色表面粉末状第23页/共76页 24Aspergillus flavus - Microscopic Morphology, 100x Lactophenol cotton blue 黄曲霉菌( 二列为主)分生孢子头、分生孢子梗、顶囊、瓶梗、梗基、分生孢子第24页/共76页 25Penicillium species - Colonial Morphology, Sabouraud agar 青霉属 气生菌丝密毯状第25页/共76页 26Penici