D二聚体的检测及临床应用.pptxVIP

D二聚体的检测及临床应用第1页/共28页 纤维蛋白原和纤维蛋白被降解，所产生的各种碎片、二聚体、多聚体及复合物，即FgDP和FbDP统称为纤维蛋白（原）降解产物（FDP） D-二聚体是纤维蛋白单体经活化因子FXⅢa交联形成纤维蛋白后，再经纤溶酶水解所产生的特异性降解产物。 第2页/共28页 第3页/共28页 检验项目的质量控制第4页/共28页 第5页/共28页 第6页/共28页 ★病人准备（受检者状态的影响）①随年龄的增长特别是老年人D-二聚体的水平有所升高，与年轻人相比有显著性差别。随孕期的延长妊娠妇女的D-二聚体水平也升高，且双胎妊娠升高的更明显。②在脑血管卒中、溶血栓治疗、严重感染、脓毒血症、组织坏疽、先兆子痫、甲状腺功能减低、重症肝病、结节病等情况下，常有凝血和纤溶系统的激活，也可见D-二聚体升高。因此，在进行某种疾病诊断时，应考虑病人已患疾病及病情对诊断的影响。第7页/共28页 ③高脂血症患者纤溶系统活性受到抑制，血浆D-二聚体结果常偏低，易造成假阴性。也有报道，饮酒者较不饮酒者D-二聚体水平有显著升高。④药物影响 使用尿激酶进行溶栓治疗时，D-二聚体水平显著升高。尿激酶（UK）、链激酶（SK）等能直接将纤溶酶原转变为纤溶酶，促使体内纤维蛋白溶解系统活性的增强；口服避孕药和雌激素能增加凝血活性，降低纤溶活性；肝素则可促进组织纤溶酶原激活物（t-PA）的释放，而增强纤溶活性 。第8页/共28页 ★检验样本的采集①采血方法：采血时，一般要在病人空腹、安静状态下进行，以早晨07:00至09:00最为适宜，因为生物钟时间对检测指标有一定的影响。对于多次反复采血的病人最好在同一固定时间和同一条件下采血。②止血带：一针见血，见血即去③采血顺序：血培养——凝血项目——不抗凝项目——抗凝项目 第9页/共28页 ④采完血后应拔掉针头，将血液沿管壁缓缓注入试管，要避免产生气泡，因为泡沫的产生可使纤维蛋白原变性。血液和抗凝剂混匀时应轻轻颠倒，避免用力振荡而破坏凝血蛋白。⑤抗凝剂⑥标本的贮存：血液要求采集于塑料或硅化试管中，并采用塑料移液管分离血浆。血浆贮存在塑料或硅化、带塞子的试管中，因为玻璃可以激活因子Ⅻ，从而可以激活纤溶酶原，启动纤溶系统，而影响检测结果。 第10页/共28页 ★干扰物质的影响D-二聚体在测定过程中易受血浆中多种干扰物质的影响，如类风湿因子（RF）、胆红素、肝素、血脂等。不同测定方法和试剂，受干扰的程度也不一致。一般认为，总胆红素＜17μmol/L，结合胆红素＜6.8μmol/L，非结合胆红素＜10.2μmol/L，血红蛋白＜150g/L，乳糜＜1960浊度单位，类风湿因子＜5KU/L，对测定值无影响。研究表明，测定D-二聚体时，当血浆中类风湿因子（RF）增高时，会导致D-二聚体测定结果偏高，引起D-二聚体阳性率明显升高；建议当临床上依据D-二聚体实验结果作为排除静脉血栓性疾病时，应排除RF的存在。 第11页/共28页 D-二聚体检测的方法★胶乳凝集法：经典胶乳凝集法是将被检血浆中D-二聚体与包被在乳胶颗粒上的单克隆抗体相作用，产生絮状沉淀反应进行定性或半定量测定。该法操作简便、快速，适用于床边检测（POCT），常作为筛查试验用。★酶联免疫吸附法（ELISA）：ELISA法检测原理是包被抗人D-二聚体与待测标本中抗原结合，加入酶标抗体后形成复合物，再加入底物呈显色反应，测得的吸光度值与标本中抗原量成正比。该法具有灵敏度高、定量准确等特点，但经典ELISA法操作步骤复杂、费时，不适合急诊使用。 第12页/共28页 ★自身红细胞凝集法：自身红细胞凝集法采用分别针对D-二聚体和红细胞膜上表位的双抗体，当血中D-二聚体水平升高时，抗原-抗体结合的增多而导致红细胞凝集，2min内可以判断结果，为半定量的自身红细胞凝集试验。其优点是可用全血检测，省去了离心制备血浆的麻烦。 ★胶体金显色反应法：该法是将单克隆抗体吸附在多孔薄膜并粘放在有多层吸收垫的塑料盘上，被检标本加入后即与该抗体结合，然后加入胶体金标记的抗体，在薄膜上即产生红色强度，红色强度与血浆中抗原成比例，在几分钟内即可完成。该法易受白细胞、血小板、类风湿因子、肝素及血脂等物质的干扰，特异性不强，在不同的报道中其敏感性和阴性预测值（NPV）差别较大，并且厂商和实验室的结果存在较大的差异。第13页/共28页 ★胶乳免疫比浊法：胶乳免疫比浊法是样本中抗原与包被在胶乳颗粒上的单克隆抗体发生抗原-抗体反应，在一定的缓冲体系中产生凝集而导致浊度增大，浊度的变化率与抗原浓度成正比。目前，已有多种全自动血凝仪用于免疫比浊法D-二聚体的检测，整个检测过程可以由仪器自动完成，检测效率高，除去准备标本的时间，一般只要5min便可报告准确的定量结果。该法有操作简便、快速、定量准确、敏