医药健康原核生物基因表达调控.pptxVIP

医药健康原核生物基因表达调控;第一节 乳糖操纵子; ;当诱导物不存在时,操纵子以极低的基础水平转录 诱导物的加入激活转录,使lac mRNA水平迅速上升 诱导物一旦除去,转录立刻停止,lac mRNA极不稳定很快降解,细胞内lac mRNA含量恢复到诱导前的基础水平 诱导后蛋白质含量的上升相对于mRNA水平的变化存在一个滞后期 诱导物除去后,酶的合成立即停止,但由于蛋白质较稳定,酶活性可长时间保持在诱导水平;操纵子;反式作用突变鉴定调节基因: lac I– :阻遏蛋白不能识别操纵基因 为隐性遗传,只要引入正常的lac I＋基因,并进行诱导,即可恢复正常的调控 lacIs :调节蛋白不能和诱导物结合 为显性遗传,突变的阻遏蛋白和细胞内所有的乳糖操纵子结合并阻遏转录,即使有野生型阻遏蛋白存在也不会脱离;顺式作用突变来鉴定操纵基因: Oc 突变:操纵基因发生突变,不能和阻遏蛋白结合 导致RNA聚合酶可以不受限制地从启动子开始转录,结构基因组成型表达; ??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????;乳糖操纵子模型: Z、Y、A基因的产物由同一条多顺反子的mRNA分子所编码。;该mRNA分子的启动子(P)位于调节基因(I)与操纵区(O)之间,不能单独起始半乳糖苷酶和透性酶基因的高效表达。操纵区是阻遏蛋白的结合位点。 ;当阻遏物与操纵区相结合时,lac mRNA的转录起始受到抑制。 活性阻遏蛋白是由4个相同亚基组成的同源四聚体 阻遏蛋白具有两个结合位点:操纵基因结合位点和诱导物结合位点 阻遏蛋白和DNA的结合能增强RNA聚合酶结合DNA的能力,只是结合的RNA聚合酶不能起始转录 ;阻遏蛋白单体的结构: 由N端DNA结合域、铰链区和核心区三部分组成 DNA结合域包含两个α螺旋,由一个转角分开 铰链区连接DNA结合域和核心区 核心区 由核心结构域1和核心结构域2组成; 诱导物结合在两个结构域之间的裂隙中; C端负责亚基间的寡聚化;诱导物通过与阻遏物结合,改变它的构象,使之不能与操纵区相结合,从而激活lac mRNA的转录。 ;诱导物和结合于操纵基因上的阻遏???结合,使其从操纵基因上释放。而不是和游离阻遏物结合,影响阻遏物和DNA结合的平衡 ;阻遏蛋白结合诱导物后构型的变化: 阻遏物由两个二聚体组成四聚体; 二聚体的两个DNA结合域可以同时插入DNA大沟的两个相邻连续转角; 诱导物结合,改变了DNA结合域和核心区之间的角度方向,使二聚体两个头部不能同时和DNA结合,从而降低和操纵基因的亲和力;阻遏物同时结合两个操纵基因 乳糖操纵子的操纵基因两侧,还存在两个较弱的额外操纵基因(pseudo-operator) 完全阻遏转录,阻遏蛋白四聚体除了和操纵基因结合外,还需要和其中一个额外操纵基因结合 同时和四聚体结合的两个操纵基因之间的DNA,弯曲形成环状结构;诱导物改变阻遏蛋白在DNA上的分布,而不是产生游离阻遏蛋白: 随机DNA序列和阻遏蛋白也具有亲和力,但比操纵基因和阻遏蛋白的亲和力低107倍 诱导物和阻遏蛋白结合时,阻遏蛋白和操纵基因的亲和力下降,所有阻遏蛋白结合在DNA的随机序列上 除去诱导物后,阻遏蛋白恢复活性,从随机位点直接转移到操纵基因上;;乳糖操纵子;操纵子模型 正调控和负调控: 根据操纵子在没有调节蛋白时的反应来定义: 负调控基因除非被阻遏蛋白关闭,否则一直表达 正调控基因只有在活性调节蛋白存在时,才会被表达 诱导和阻遏: 根据操纵子对调节其表达的小分子所产生的不同应答反应来定义 诱导物:An inducer is a small molecule that triggers gene transcription by binding to a regulator protein. 辅阻遏物:A corepressor is a small molecule that triggers repression of transcription by binding to a regulator protein. ;第21页/共73页;第二节操纵子的其他调控形式;;第24页/共73页;二、大肠杆菌色氨酸操纵子的衰减作用: Trp mRNA的5’端有139个核苷酸组成的前导序列,前导序列有4个区域彼此互补:1－2,2－3,3－4,3－4发夹结构随后为8个连续U Trp mRNA的5’编码14个氨基酸组成的前导肽,前导肽特点是含有两个连续Trp 细菌中,转录和翻译耦联,RNA聚合酶刚转录出部分前导序列,核糖体就开始翻译 ;;;