粮食中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素的检测 量子点微球荧光免疫层析法.docxVIP

DBXX/ XXXXX—XXXX PAGE I 粮食中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素的检测 量子点微球荧光免疫层析法 范围 本文件规定了粮食中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的量子点微球荧光免疫层析检测方法。 本文件适用于大米、糙米、玉米、小麦等粮食及其制品中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的快速检测。 本方法检测黄曲霉毒素B1的检出限为1 μg/kg，定量限为2 μg/kg；检测玉米赤霉烯酮的检出限为10 μg/kg，定量限为20 μg/kg；检测呕吐毒素的检出限为50 μg/kg，定量限为150 μg/kg。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 2761 食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量 GB/T 5491 粮食、油料检验 扦样、分样法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27417 合格评定 化学分析方法确认和验证指南 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 原理 本方法以量子点微球为荧光标记物，基于竞争抑制免疫层析技术原理，通过荧光信号读取仪进行数据读取和分析，根据已设定的标准曲线计算样品中待测物质的含量，对黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素进行半定量或定量检测。 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯 水：应符合 GB/T 6682，二级水。 黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素标准物质：纯度≥99％，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 乙腈（C2H3N）。 氯化钠（NaCl）。 氯化钾（KCl）。 磷酸氢二钠（Na2HPO4）。 磷酸二氢钾（KH2PO4）。 样品提取液（84％乙腈-水溶液）：吸取84 mL乙腈（5.3），用水（5.1）定容至100 mL，混匀。 样品稀释液：分别称取氯化钠（5.4）8 g、氯化钾（5.5）0.2 g、磷酸氢二钠（5.6）1.44 g、磷酸二氢钾（5.7）0.2 g于1000 mL烧杯中，加水（5.1）充分搅拌溶解后定容至1000 mL。 黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素标准品储存液（1 g/L）：准确称取真菌毒素（5.2）0.01 g（精确至 0.0001 g），用甲醇（5.3）溶解定容至10 mL。-20℃冷冻避光保存，有效期12 个月。 仪器和设备 分析天平：感量分别为0.01 g和0.01 mg。 微量移液器：量程为20～200 μL、100～1000 μL和1～10 mL。 旋涡混合器：转速≥2500 r/min。 恒温孵育器：设定温度误差不超过±1度。 荧光免疫分析仪：激发波长为360±5 nm，发射波长为610±5 nm。 离心机：转速≥4000 r/min。 离心管：1.5 mL和50 mL。 分样筛：20目。 黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素量子点微球荧光免疫层析快速检测卡（含ID卡，内设对应批次标准曲线）。 试样制备 分样和粉碎 将原始样品充分混匀，按照GB/T 5491方法中的四分样方法进行分样，用粉碎机粉碎后过20目分样筛。 试样前处理 称取5±0.05 g粉碎样品于50 mL离心管中，加入25 mL样品提取液（5.8），漩涡震荡混匀2 min，4000 rpm离心2 min或静置2分钟（无离心机情况下）。 检测黄曲霉毒素B1：取50 μL离心后上清液加入950 μL样品稀释液（5.9）混匀后用于检测。 检测玉米赤霉烯酮：取50 μL离心后上清液加入700 μL样品稀释液（5.9）混匀后用于检测。 检测呕吐毒素：取50 μL离心后上清液加入700 μL样品稀释液（5.9）混匀后用于检测。 注：不同厂家检测卡所用的样品前处理方法可能不同，应按照产品使用说明中规定方法进行操作。 检测步骤 测试前打开荧光免疫分析仪（6.5），确认试剂盒中的ID卡与试剂盒的批号是否匹配后插入ID卡，在仪器测试界面点击“读ID卡/读项目”，界面出现“读取完成”，点击“确认”即可使用。 将恒温孵育器（6.4）开机，待温度升至37℃即可使用。 从包装铝箔袋中取出检测卡，在半小时内使用。 将检测卡平放，用微量移液器吸取90 μL稀释后的待测液于检测卡的加样孔（S）中，在恒温孵育器中37℃孵育反应10 min。 反应时间结束后立即将检测卡插入读取仪中，点击仪器界面的“测试”，仪器会自动给出定量测试结果，15 min后测试无效。 注：不同厂家读卡仪所用仪器界面设置可能不同，应按照仪器使用说明中规定方法进行。 结果表述 样品中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的含量由荧光分析仪自动计算并显示，单位为微克/千克（μg/kg）。 其他 本方法参比标准为GB 500