农药及代谢产物的测定.ppt

第七章 农药及代谢产物的测定 第一节 有机磷农药 有机磷农药绝大多数为杀虫剂，如常用的对硫磷、内吸磷、马拉硫磷、乐果、敌百虫及敌敌畏等，近几年来已先后合成杀菌剂、杀鼠剂等有机磷农药。 有机磷农药多为磷酸酯类或硫代磷酸酯类，其结构式中R1、R2多为甲氧基（CH3O-）或乙氧基（C2H5O-）；Z为氧（O）或硫（S）原子：X为烷氧基、芳氧基或其他取代基团。 一、理化性质 有机磷农药大多呈油状或结晶状，工业品呈淡黄色至棕色，除敌百虫和敌敌畏之外，大多是有蒜臭味。一般不溶于水，易溶于有机溶剂如苯、丙酮、乙醚、三氮甲烷及油类，对光、热、氧均较稳定，遇碱易分解破坏，敌百虫例外，敌百虫为白色结晶，能溶于水，遇碱可转变为毒性较大的敌敌畏。 二、代谢和生物监测指标 接触途径：农药的生产过程中，特别是出料、分装。施用农药以及装卸、运输、供销、保管过程中。 吸收：有机磷农药中毒的途径可通过皮肤进入人体。在喷洒过程的气雾可由呼吸道吸入；误服者由消化道吸收。 分布：吸收后经血液和淋巴系统很快分布到全身，肝脏最高，还可以结合人蛋白质。 代谢： 氧化：脱硫作用、脱烷基、脱烷酰基、硫酯基的氧化。毒性增强。 水解：降低毒性。 结合：氧化产物，水解产物结合羧酸、醇、酚等而排泄，避免了抗胆碱酯酶活性。 与蛋白质共价结合：迟发性神经毒性。 正常生理情况： 胆碱酯酶+乙酰胆碱（神经传递介质） ↓ 乙酰胆碱酯酶 ↓ 胆碱酯酶+乙酸+胆碱 有机磷农药中毒： 抑制了胆碱酯酶的活性，造成组织中乙酰胆碱的积聚，其结果引起胆碱能受体活性紊乱，而使有胆碱能受体的器官功能发生障碍。 生物监测指标 1、血液中胆碱酯酶活性作为接触生物指标或效应性生物标志物。 轻度中毒：全血胆碱酯酶活性降至正常人的70%～50% 中度中毒：正常人的50%～30% 重度中毒：正常人的30%以下 2、血液中有机磷农药：接触性生物标志物 三、样品采集 1.血液中有机磷农药测定： 准确采取肘静脉血2.5ml，立即置于盛有0.1mol/L盐酸溶液7.5ml的试管中，冰冻贮存。 2.血液中胆碱酯酶活性测定：末梢血。 四、血液中有机磷农药的测定 1. 原理： 血液中有机磷农药在酸性条件下，环己烷萃取，气向色谱测定。 2.仪器条件： 色谱柱：2m×3.2mm； Chromsorb W-HP，80~100目；固定液：SE-30柱温：200℃； 汽化室温度：240 ℃ ； 检测室温度：240 ℃； 载气为高纯氮气，流量：50ml/min。 燃气：氢气。 3.样品处理和测定 ①绘制标准曲线：0.4,2.0,4.0μg/ml. ②用环己烷萃取：取8ml+2ml环己烷振荡，离心。 ③PT-C18色谱预处理柱净化：上清液。 ④定容：氮气流挥发至0.1ml。 ⑤进样：1~5ml。 五、全血胆碱酯酶活性的测定 （一）三氯化铁分光光度法 1.原理 红棕色羟肟酸铁配合物 520nm （1）. 绘制标准曲线 ①用ph=7.20的磷酸缓冲液配置乙酰胆碱标准系列，0~4.00μmol。 ②各管+碱性羟胺溶液4ml，振摇3min; ③加1+2盐酸2ml，振摇1min； ④加10%三氯化铁溶液2ml，摇匀，过滤。 ⑤520nm处，测定吸光度，绘制标准曲线。 2、样品处理和测定 （2）. 样品处理和测定 ①取A和B两管,各加入水0.96ml及耳垂血40u1,摇匀,置于37℃水浴中,预热5~10min. ②向样品管A中, 加乙酰胆碱标准液1ml,准确计时, 于37℃±0.5℃水浴30min后，立即加碱性羟胺4ml,振摇3min终止反应。 2、样品处理和测定 ③向对照管B中，先加碱性羟胺4ml，振摇3min，再加乙酰胆碱标准液1ml。 ④向A和B两管中, 各加1+2盐酸2m1,振摇1min, 然后各管加10％三氯化铁溶液2ml,摇匀, 过滤。于520nm处测定吸光度。 （3）.结果计算 被水解乙酰胆碱的吸光度＝B管吸光度－A管吸光度 被水解乙酰胆碱的量（μmol） 40u1血 胆碱酯酶活性绝对值（C） 全血胆碱酯酶活性值(μmol/ml)＝C/0.04 正常人全血胆碱酯酶活性值 胆碱酯酶活性百分数： 接触者全血胆碱酯酶活性值 ×100% ＝ 3. 注意事项 ①采血时不应过度挤压耳垂。如果过度挤压耳垂，采得的血液中血清或组织液占比例过多，结果偏低。 ②氯化乙酰胆碱在空气中极易潮解，称量速度要快。 ③水浴温度和时间对酶作用有明显影响，温度控制在37±0.5 ℃，时间控制在0.5min内。 ④加三氯化铁显色后，棕红色配合物易褪色，必须在5~10min比色。 ⑤计算胆碱酯酶活性百分数需要健康人群全血胆碱酯酶活性值作标准