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第一页,共十二页,2022年,8月28日 实验原理 咖啡因又称咖啡碱, 是可可类食品及饮料,茶叶中含有的嘌呤类生物碱, 是多数药物含有的成分,它能促进血液流通,扩张血管,并且有利尿,兴奋中枢神经等功能咖啡因的三氯甲烷溶液在276.5nm波长下有最大吸收,其吸收值的大小与咖啡因浓度成正比,从而可进行定量。 第二页,共十二页,2022年,8月28日 实验器材 器材:紫外-可见分光光度计、石英比色皿、 容量瓶、吸耳球,洗瓶,胶头滴管,玻璃棒、烧杯 药品:三氯甲烷溶液、 1.5%高锰酸钾溶液 、亚硫酸钠和硫氰酸钾混合溶液、咖啡因标准 储备液(配置方法:称取0.05g咖啡因 定容至100ml容量瓶中即可) 第三页,共十二页,2022年,8月28日 实验步骤 1、量取20ml脱气可乐于250ml分液漏斗中,加入1.5%高锰酸钾溶液5ml,静置5分钟,加入10ml混合溶液,50m重蒸三氯甲烷溶液,振摇100次,静置分层,收取三氯甲烷。 2、再加入40ml重蒸三氯甲烷溶液摇匀, 静置分层将两次三氯甲烷萃取溶 液合并,用三氯甲烷溶液定容至 100ml,待用。 第四页,共十二页,2022年,8月28日 3、从0.5mg/mL的咖啡因标准储备液中,用重蒸三氯甲烷配制成浓度分别为0,5,10,15,20g/mL的标准系列,以0g/mL作参比管,调节零点,用1cm比色皿于276.5nm下测量吸光度,作吸光度-咖啡因浓度的标准曲线或求出直线回归方程。 第五页,共十二页,2022年,8月28日 4、在25mL比色管中,加入5g无水硫酸钠,倒入20mL样品的三氯甲烷制备液,摇匀,静置。将澄清的三氯甲烷用1cm比色皿于276.5nm测出其吸光度,根据标准曲线(或直线回归方程)求出样品的吸光度相当于咖啡因的浓度 第六页,共十二页,2022年,8月28日 溶液配制及吸光度数值 序号 类别 1 2 3 4 5 样品 咖啡因储备液 加入咖啡因储备液0ml 加入咖啡因储备液1ml 加入咖啡因储备液2ml 加入咖啡因储备液3ml 加入咖啡因储备液4ml 加入5g无水硫酸钠 三氯甲烷溶液 加入三氯甲烷重蒸液20ml 加入三氯甲烷重蒸液19ml 加入三氯甲烷重蒸液18ml 加入三氯甲烷重蒸液17ml 加入三氯甲烷重蒸液16ml 加入三氯甲烷制备液20ml 吸光度A 0 0.225 0.521 0.734 1.052 0.968 第七页,共十二页,2022年,8月28日 标准曲线 第八页,共十二页,2022年,8月28日 第九页,共十二页,2022年,8月28日
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