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标准菌株管理程序 目的 对微生物标准菌株进行有效管理，确保标准菌株符合要求，保证检测结果。 适用范围 适用于标准菌株的购置、验收、复活、确认、转代、储存、使用、废弃等。 职责 3.1主任：负责标准菌株购置计划的审批。 3.2技术主管：负责购置计划的审核。 3.3微生物检测室工作人员：负责标准菌株需求计划的提出盒标准菌株的配制、验收、评估、有效储存盒正确的使用。 3.4监督员：负责对标准菌株的使用进行监督。 4、工作程序 4.1供应商的选择：选择有资质的标准菌株的合格供应商，每批标准菌株必须附带有供应商的合格证或检测报告或说明书，来证明所采购的标准菌株是合格的。 4.2标准菌株和验收 实验室收到标准菌株，首先应进行符合性感官检查，记录菌株号和标准菌株来源途径信息，确保溯源性清楚，同时还应记录标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等情况。 4.3冻干标准菌株的复活 4.3.1开启产品包装：先用70%酒精棉擦拭外包装，从凹口处撕开产品外包装，撕掉标签上的拉片，将其贴于菌株保藏管上。 4.3.2复活：选择合适的培养基和培养条件（根据生产商说明或有关技术通则）进行复活。冻干菌株的传代次数不得超过5代，从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为F0代，捏管帽处安瓿瓶（仅一次）使其释放水合液体。垂直握住安瓿瓶并轻拍之，使液体流入含小球的管底。通过挤捏压碎小球使其与液体混合，立即将拭子浸于水合液体。挤压并旋转拭子，接种于初级培养板，接种圈的直径约为25mm，用一无菌接种环在先前接种区域划线10-20次，促使分离出单菌落。同时吸出部分菌液接种胰蛋白胨大豆肉汤管，副溶血性弧菌接种3%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤管。将接种好的平板和管立即进行培养。细菌培养温度通常为25℃或37℃。多数冻干菌株会在几天后长出，但是少数菌会表现出延滞期延长的现象，需要将正常培养时间加倍。复活后的菌株为F1代。 4.3.3将TSB生长的浓菌液吸0.5ml于菌株保藏管充分混匀后将液体吸出，将保藏管-18℃保存1-3年为标准储备菌株F2代。将平板上生长的良好菌株接种于营养琼脂斜面（副溶血性弧菌3%氯化钠营养琼脂）36℃培养24h当工作菌株，记录为F3代。 4.4工作菌株确认方法及依据 大肠杆菌的确认依照“SN 0169-1992 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法”执行。 金黄色葡萄球菌的确认依照“SN/T 0172-2010 进出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法”执行。 沙门氏菌的确认依照“SN 0170-1992 出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法”执行。 副溶血性弧菌的确认依照“SN/T 0173-2010 进出口食品中副溶血性弧菌检验方法”执行。 4.5工作菌株的储存 4.5.1大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、储存在2-8℃的冰箱内。 4.5.2副溶血性弧菌在常温条件下保存。 4.5.3储存期限：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌为3个月。 4.6标准菌株的转接 4.6.1标准菌株的复苏：1.菌种操作应在无菌条件下进行，防止杂菌污染。 4.7工作菌株的使用 4.7.1内部质量控制：一个月一次阳性对照、培养基每批验收； 4.7.2外部质量控制：能力验证、实验室比对； 4.8工作菌株的期间核查 4.8.1期间核查的频率：每半年对使用标准菌株进行一次期间核查。 4.8.2工作菌株期间核查的方法及依据：同工作菌株的确认。 4.8.3建立标准菌株期间核查记录。 4.9标准菌株的废弃 4.9.1标准菌株如已老化、退化、或变异、污染等，经确认试验不符合的或该菌种已无使用需要的应及时销毁。 4.9.2废弃的标准菌株由部门负责人批准，使用人员放入高压锅内121℃ 45min高压灭菌后作为废弃物处理。 4.10记录：实验室应记录标准菌株的配制、复活、传代、确认等工作内容并定期交文档管理员存档。 5相关文件 6记录