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基于金纳米颗粒的荧光核酸探针用于细胞内传感分析 DNA 本是生命体中的重要物质之一，它在各种生命活动中起着重要的作用。近年来， 由于DNA 分子具有独特的碱基配对特性、简洁体外合成且保持性质稳定、设计敏捷等优势， 借助于现代化学技术，科学家们开头将DNA 引入到各种检测方法的设计中来。随着争论的进展，一系列基于 DNA 的检测方法被相继报道：如比色法，电化学检测法和荧光检测法等， 并已经逐步在生物分析、环境监测、药物筛选、疾病诊断与治疗等领域得到广泛应用。在这 些分析技术中，荧光分析因其检测快速、操作简洁、灵敏度高等优点，常被科学家们用作检 测手段。同时，DNA 能够很简洁地修饰上荧光基团，且荧光信号稳定，因此科学家们研制出了很多类型的 DNA 荧光探针，如 TaqMan 探针、阴阳探针、分子信标等。DNA 荧光探 针通常是在DNA 上分别标记荧光基团和淬灭基团，在没有目标物存在时，荧光基团与淬灭基团相互靠近，荧光被淬灭，当有目标物存在时，荧光基团远离淬灭基团，荧光得以恢复。而金颗粒具有很好的荧光淬灭特性，因此它能替代淬灭基团使用，同时金纳米颗粒的比外表积大 、外表功能化易于掌握，使得巯基化的DNA 很简洁的通过 Au-S 键修饰到金颗粒上。因此，利用DNA 和金纳米颗粒可以构建各种具有特定功能的荧光探针。基于金纳米颗粒的荧光核酸探针在体外已经被广泛应用于离子、蛋白质、核酸等的检测中。同时，金纳米颗粒的直 径在 1-100 nm 之间，是一种抱负的介导材料，可以实现探针的细胞内输送。因此，基于金纳米颗粒的荧光核酸探针可以进入生物组织内部，探测各种生物分子的生理功能，在分子水 平上提醒生命奇特。 基于金纳米颗粒的荧光核酸探针用于细胞内传感的根底 当我们要实现活细胞内目标分子检测之前，有两个重要的问题必需得到解决：第一、如何抑制细胞膜的屏障，将探针输送至细胞内并保持细胞与探针的活性；其次、如何在活细胞内这样简单的生物系统中保持探针的稳定性。基于金纳米颗粒的荧光核酸探针在上述两个方面呈现了独特的优越性，如易于进入细胞、保护DNA 抗酶切、生物相容性好等，而这些优势也成为其能够被用于简单的细胞内环境中对各种生命物质进展检测与成像的重要根底。 细胞摄取 活细胞是一个简单的生物体系，细胞膜具有高度防范力量，不会让外界物质轻易进入。有些物质在进入细胞时会在细胞膜上产生出一个小小的过渡性地窖，即使这样也会使细胞膜 裂开导致细胞死亡。幸运地是科学家们觉察金纳米颗粒可以直接穿入细胞而不会在细胞膜上留下地窖，从而不会引起细胞死亡。金纳米颗粒进入细胞的速度与其尺寸、形貌及外表修饰化学 等有关。如图 1.3 所示，Chan 等争论觉察，不同粒径和形貌的金纳米颗粒进入细胞的 速度和数量都是不同的。 图 1.3 〔a〕不同粒径的金纳米颗粒在细胞中的吸取数量；〔b-f〕不同尺寸的金颗粒在细胞中的电镜图。 Mirkin 课题组觉察，DNA 修饰的金纳米颗粒尽管其外表带负电荷，却仍能被大量内吞并发挥其作用。金颗粒外表修饰的DNA 密度对于金颗粒的内吞起到重要作用，在肯定范围内，外表修饰的 DNA 越多，则细胞吞入的颗粒越多，同时他们推想DNA 修饰的金纳米颗粒与蛋白质之间的相互作用可能是其进入细胞的一个重要缘由〔图 1.4〕。 图 1.4 图示说明细胞吞入DNA-金纳米颗粒复合物的潜在机理。 提高 DNA 探针抗酶切力量 活细胞内存在的各种生化酶极易将核酸探针如分子信标、阴阳型探针等降解，严峻影响 了其在细胞内分子检测和成像中的应用。争论觉察金纳米颗粒可以有效增加修饰在其外表的核酸分子的稳定性。在一样酶浓度条件下，金纳米颗粒可将酶对DNA 的降解速度减缓 4-6倍， 这在很大程度上提高了探针在细胞内的稳定性，以满足检测的需求。有科学家猜测，由于修饰在金颗粒外表的 DNA 层带负电荷，所以在DNA 层外表聚拢了大量的钠离子，而这可能是其抗酶切力量显著提高的重要缘由，随后 Cruz 等开展的试验进一步证明白这一猜测。 用于细胞内传感的基于金纳米颗粒的荧光核酸探针 细胞内存在的各种生物分子都具有特别的生理功能，并且对生命过程起着至关重要的作 用。过去我们对于细胞内大局部分子水终生化反响的定量争论成果都来自于传统的生物化学 方法，即用各种纯化的生物分子在试管内进展试验的方法。但是细胞内的真实环境和试管中 的环境存在巨大差异。首先，生物大分子在细胞中是与其它物质一起以多分子复合物形式存 在，纯化后往往缺失了自然状态下的完整复合物功能；其次，生物分子在细胞内是动态存在 并对细胞功能产生影响的；另外，细胞内微环境的变化对生物分子间相互作用产生的影响只 有在细胞中才能被争论和观看到。因此，我们需要以活细胞为“试管”，在线实时、灵敏、准 确地检测细