蛋白质电泳技术.pptxVIP

蛋白质电泳技术第1页/共36页第2页/共36页影响电泳的环境因素电泳速度 v=μepE= εζE/(Cη)C: 6πor 4πEpH: pI(~4-7), 缓冲溶液pH(~8-9.5), 向？极泳动离子强度I: 0.02-0.2电渗温度：焦耳热介质：孔径、制胶重复性等第3页/共36页2. 分类按原理:区带电泳, (移界电泳), 稳态电泳, 显微电泳第4页/共36页3. 电泳仪及附属设备提供稳定直流电源的装置电压、电流、电功率稳定脉冲式电压 常压电泳仪(600V): 净电荷和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳高压电泳仪(3kV): 载体两性电解质等电聚焦电泳和DNA测序超高压电泳(30-50kV): 毛细管电泳第5页/共36页电泳槽板状电泳槽水平板垂直板管状电泳槽*自由界面电泳槽DYCZ-22B型　?单垂直电泳仪(槽)（大号） DYCP-33A型 琼脂糖水平电泳仪(槽)(中号) 第6页/共36页4.电泳的支持介质特性（要求）物理化学性质稳定化学惰性 均匀 种类分离原理特性物质薄膜类电荷密度化学惰性对流扩散小纸、醋酸纤维素薄膜、聚酰胺薄膜凝胶类电荷密度分子大小同上+多孔性分子筛效应（淀粉）、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶、新型凝胶介质第7页/共36页5.检测-染色方法考马斯亮蓝：常用荧光染料：灵敏硝酸银：灵敏酶活性免疫学：专一特殊蛋白质糖蛋白、脂蛋白、铁蛋白、铜蛋白第8页/共36页三苯基甲烷衍生