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- 2023-07-04 发布于山东
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第3节 基因工程及生物技术的安全性和
伦理问题
知识点95 重组DNA技术的基本工具
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1 我国华南农业大学科研人员利用农杆菌转化法将抗环斑病毒基因导入番木瓜,培育出转基因抗病番
木瓜 。下列叙述错误的是
A.限制酶可在Ti质粒上切出一个切口暴露出两个游离的磷酸基团
B.不同的限制酶切割DNA产生的末端一定不同
C.可以用同种限制酶切割Ti质粒和含有抗环斑病毒基因的DNA片段
D. T4 DNA连接酶既能连接黏性末端,又能连接平末端
答案
1.B 限制酶可以识别双链DNA特定的核苷酸序列,并切开每条链中特定部位的磷酸二酯键,Ti质粒为环
状DNA,故限制酶可在Ti质粒上切出一个切口暴露出两个游离的磷酸基团,A正确 。不同的限制酶切割
形成的末端可能相同,也可能不同,B错误 。可以用同种限制酶切割Ti质粒(运载体)和含有抗环斑病毒基
因( 目的基因)的DNA片段,以形成相同的末端,便于连接,C正确 。T4 DNA连接酶既能连接黏性末端,又
能连接平末端,只是连接平末端的效率较低,D正确 。
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2 限制性内切酶EcoR Ⅰ识别并切割 双链DNA,用EcoR Ⅰ完全酶切果蝇基因组DNA,理论
上得到DNA片段的平均长度(碱基对)约为
A.6 B.250 C.4 000 D.24 000
答案
2.C 据题意可知,限制性内切酶EcoR Ⅰ的识别序列为 ,则理论上,该序列出现的概率
为1/(4×4×4×4×4×4) 1/4 096,即4 096个碱基对序列中会出现一个限制性内切酶EcoR Ⅰ的识别序列,
故用限制性内切酶EcoR Ⅰ完全酶切果蝇基因组DNA,理论上得到DNA片段的平均长度(碱基对个数)约
为4 000,C项符合题意 。
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3 限制酶BamH Ⅰ和BglⅡ是两种常见的工具酶,它们的识别序列及切割位点依次为G↓GATCC和A↓GATCT 。
研究中用BamH Ⅰ切割DNA获得 目的基因,用BglⅡ切割质粒,并连接得到重组质粒 。下列相关叙述不正确的
是
A.经限制酶BamH Ⅰ和BglⅡ切割后形成的黏性末端相同
B.经这两种酶处理得到的重组质粒不能再被这两种酶所识别
C.酶切过程中,需控制好酶浓度 、温度和反应时间等因素
D.分别用这两种限制酶切割,保证了目的基因定向插入质粒
答案
3.D 由题干信息可知,限制酶BamH Ⅰ和BglⅡ的识别序列及切割位点依次为G↓GATCC和A↓GATCT,故经
限制酶BamH Ⅰ和BglⅡ切割后形成的黏性末端相同,A正确 。经这两种酶处理得到的重组质粒的相应部位的
序列不能再被这两种酶识别,因此重组质粒不能再被这两种酶识别并切割,B正确 。酶活性受温度的影响,酶
切效率还会受酶浓度和反应时间的影响,因此,酶切过程中,需控制好酶浓度 、温度和反应时间等因素,C正确 。
这两种酶切割形成的黏性末端相同,因此分别用这两种限制酶切割,不能保证 目的基因定向插入质粒,D错误 。
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4 如图为某种质粒的简图,箭头所指分别为限制酶EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ的酶切位点,P为转录的启动部位 。已知
目的基因的两端均有EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ的酶切位点,受体细胞为无任何抗药性的原核细胞 。下列叙述正确
的是
A.将含有 目的基因的DNA与质粒分别用EcoR Ⅰ切割,在DNA连接酶作用下,由两个DNA片段连接形成的产物
有两种
B.DNA连接酶的作用是将酶切后得到的黏性末端连接起来,形成一个重组质粒时形成两个磷酸二酯键
C.为了防止 目的基因和质粒 自身环化,切割时可选用的酶是EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ
D.能在含青霉素的培养基中生长的受体细胞中已成功导入该 目的基因
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答案
4.C 将含有 目的基因的DNA片段与质粒分别用EcoR Ⅰ切割,那么酶切后二者的黏性末端相同,在DNA
连接酶的作用下,由两个DNA片段连接形成的产物有三种,其
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