艾滋病检测技术新进展.pptxVIP

第1页/共76页艾滋病检测技术新进展第2页/共76页艾滋病检测技术新进展及其应用第3页/共76页内容提要1.HIV急性期感染或窗口期感染检测（Ab/Ag联合检测和集合PCR）2.婴幼儿早期诊断 （nest RT-PCR）3.快速检测策略及质控第4页/共76页为什么HIV急性感染（AHI）越来越受到重视？公共卫生意义：HIV-1 流行形势严峻1、HIV-1持续流行： 全球HIV流行和AIDS仍继续增加，尤其是MSM同性恋人群，多达50% HIV 传播发生在疾病急性和早期，（流行病学意义）2、高病毒RNA水平： 性传播感染仍具首位，生殖道 HIV RNA 水平相当于血液中HIV RNA水平。高病毒载量、独特的病毒特性以及缺乏中和抗体，急性期感染者感染性极高。VL10 M copies/mm33、极易垂直传播： 怀孕妇女感染HIV非常常见，增加HIV垂直传播的危险。2011年4月全国报告的HIV感染者（5560例）中，母婴传播占1.3%；AIDS病人（2806例）中，母婴传播占1.0%。 第5页/共76页为什么HIV急性感染（AHI）越来越受到重视？4、应尽早尽快进行诊断： HIV感染急性期，感染者无症状和流感样症状而经常漏检而误诊，感染者本人不知自己感染状态，极易在高危人群中传播5、应尽早进行人群干预： 实时对感染者及其配偶、孕妇感染者及其婴儿进行干预，知晓感染状态，减少危险性行为；了解和干预复杂的性传播网6、应尽早进行病毒干预： 在AHI时期进行可能的干预以限制HIV复制和整合入病毒潜伏池、（整合后不可治愈），早期抗病毒治疗的必要性(转变观念)7、指导疫苗研究： 基于急性期感染时期的传播性/奠基者病毒的特性8、建立人类自然模型： 研究AHI个体，为详细了解人类HIV传播事件提供最好的机会公共卫生意义：早诊断、早干预、早治疗、降两率、指导疫苗研究第6页/共76页如何发现 HIV急性感染AHI？前瞻性队列研究：高危人群 方法：前瞻性随访高危人群队列发现阳转感染者（MSM,IDU, SW,单阳伴侣） 限制：1）前瞻性随访HIV阴性人群的巨额花费； 2）在阳转时刻或接近阳转时难以找到研究对象，难以采集到急性期血 清阴性病毒血症期峰值的样本；（美国国防部联手NIH 已经启动疫苗免疫性队列研究 RV217， 每周二次检测HIV RNA，试图发现AHI；我国十一五重大专项也启动了急性期感染的研究）横断面研究：普通人群 血液中心通常使用集合（6-96份血浆）NAT筛查，阳性集合拆分并检测出个体感染者，使用病毒特异性“区别”NAT检测确认，阳性者纳入转诊和报告系统 美国北卡卫生部门制定和实施了全州所有公共HIV检测点筛查AHI规划，对所有抗体阴性样本进行集合NAT RNA检测。及时转诊、咨询、治疗和前瞻性研究第7页/共76页 怎样检测HIV-1早期感染?血清阳转血清阳转前的方法血清阳转后的方法RNA+ Ab-抗体检测临界值 特异性抗体比例反应指标P24+ Ab -RNAAb感染p24时间第8页/共76页HIV血清阳转窗口期从感染HIV到抗体呈阳性反应这段时间血浆中含有高浓度HIV RNA有很高的传染性现在普遍认为2周～3个月,个别案例达6个月。第9页/共76页HIV感染各种检测方法的窗口期HIVAb检测（第三代试剂）：窗口期约28天HIVAb/Ag联合检测（第四代试剂）：窗口期约15天核酸检测： 窗口期约10天第10页/共76页窗口期感染者的病毒学特征病毒载量值范围为3.84~6.84Log10Copies/mL；28例窗口期病例，病毒载量百万级有10份（35.71%）；十万级9份（32.14%）；万级的样品7份（25%）；万级以下的样品2份，占总样品数的7.14%。第11页/共76页40份WB不确定样品WB条带　W B条带W B不确定R N A阳性p2426(65%)7(26.9%)p24+gp1609(22.5%)3(33.3%)p24+p174(10%)4(100%)p24+p551(2.5%)1(100%)合计4015第12页/共76页HIV急性期感染或窗口期感染检测方法1.Ab/Ag联合检测: ELISA2.HIV RNA检测: 集合PCR第13页/共76页HIV Ab/Ag联合检测检测早期HIV感染的效果与单独HIV-1抗原的试剂相当与RT-PCR方法相比，平均滞后时间是大约3.23天与第三代抗体试剂相比，窗口期缩短了1.56 到 5.32天检测献血员的特异性是99.80%第四代试剂的敏感性和特异性均有所提高第14页/共76页HIV Ag检测：HIV AgP固相 血清 / 血浆 结合物 1 / 结合物 2TMB / H2SO4HIV 1 Ab :抗p24单抗 ………..… 生物素标记的抗HIV单抗 …….. 亲和素标记的过氧化物酶结