大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告).docxVIP

大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定 一、 实验目的 熟悉蒽醌类成分的提取分离方法 掌握pH 梯度提取法的原理和操作技术 学习蒽醌类化合物鉴定方法 二、 实验器材 材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO 、Na CO 、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙 3 2 3 醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛 PH 试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。 仪器：500mL 圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。 三、 实验原理 OHOOHR1R2O大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要成分 为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强； OH O OH R1 R2 O 大黄酸 R =H R =COOH 1 2 大黄素 R =CH R =OH 1 3 2 芦荟大黄素 R =CH OH R =H 1 2 2 大黄素甲醚 R =CH R =OCH 1 3 2 3 大黄酚 R =CH R =H 1 3 2 四、 实验内容 大黄素的提取、分离流程图 大黄粗粉 10g 20%H SO 150 ml 2 4 加热 1h, 抽滤、干燥 滤饼 150ml 乙醚回流提取 1 h 乙醚层 5%NaHCO 萃取 5%NaHCO 萃取 3 水层（紫红色） 乙醚层HCl 5%Na 5%Na CO 2 3 水层（红色） 乙醚层HCl % NaOH 大黄素沉淀（粗品） 水层（红色） 芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物） 具体操作步骤 游离蒽醌的提取 酸水解：称取大黄粗粉10g，加 20%H SO 水溶液 150mL，在水浴上加热1 小时，放 2 4 冷，抽滤，滤饼用 NaOH 溶液洗至近中性（pH 约为 6），于 70℃干燥后，研碎，置 250mL 圆底烧瓶中，加入乙醚 150mL 回流提取 1 小时（调 45℃，回流即可），得到乙醚提取液。 蒽醌类成分的提取：乙醚提取液经薄层层析检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。薄层板为硅胶—CMC 粘合板，展开剂为石油醚（60～90℃）：乙酸乙 酯（7：3）近水平或直立展开，在可见光下，可看到四个斑点。其中最上面黄色斑点为大黄 酚和大黄素甲醚的混合物,在此条件下,不能分开,其余 3 个斑点依Rf 值（由大到小）的顺序 是大黄素（橙色斑点）、芦荟大黄素（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点），记录图谱并计算 Rf 值。 PH 梯度萃取分离 将乙醚提取液加入 250mL 分液漏斗中（使用前先检漏），以 35 mL 5 % NaHCO 水 3 溶液萃取三次，乙醚层经薄层层析检查（展开剂同上），指示已提尽大黄酸后，合并三次 NaHCO 3 萃取液，用浓盐酸酸化至PH 2-3 左右，析出大黄酸沉淀。（注意：加酸时应缓慢加入，以防酸液溢出，如出现分层现象，需将上层乙醚蒸去才能析出固体）。抽滤后，刮下颗粒并称重。 经 5% NaHCO 水溶液萃取后的乙醚层，继以 35 mL 5 % NaCO 水溶液萃取三次，乙 3 2 3 醚层经薄层检查（展开剂同上），指示已提尽大黄素后，合并三次 Na CO 萃取液，用浓盐酸 2 3 酸化至PH2-3 左右，析出大黄素沉淀。（酸化时注意操作同前）。抽滤后，刮下颗粒并称重。 经 5% Na CO 水溶液萃取过后乙醚层以 35 mL % NaOH 水溶液萃取四次，乙醚层经 2 3 薄层检查（展开剂同上），指示已提尽后，合并三次 NaOH 萃取液，用浓盐酸酸化至PH2-3左右，析出芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚沉淀混合物。（酸化时注意操作同前）。抽滤后， 刮下颗粒并称重。 样品鉴定 (1) 碱液试验 分别取各蒽醌结晶数毫克置于样品管中，加 2%氢氧化钠溶液 1ml，观察颜色变化。凡有互为邻位或对位羟基的蒽醌呈蓝紫至蓝色，其它羟基蒽醌呈红色。 五、 注意事项： 游离蒽醌的提取要控制温度，回流不宜太剧烈。 pH 梯度萃取分离时，以保证提取充分，可以用薄层色谱作监测。 注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。 六、 数据记录、结果讨论与分析： 3.60cm5cm 3.60cm 5cm 2.05cm Rf 大黄素=5= Rf 芦荟大黄素=5= Rf 大黄酸=5= 1、大黄酸沉淀 2、大黄素沉淀 3、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀混合物 分别取各上述沉淀（蒽醌结晶）数毫克置于样品管中，加 2%氢氧化钠溶液 1ml 后，观察到各样品管中溶液均呈红色、但第 1 根管中颜