细菌内毒素检查法.pptVIP

十、干扰试验结果分析 反应结果7：抑制 E0.5 E0. 25 E0.125 E0.06 NC Es ++++ ++++ ++++ - - - - - - 0.125Eu／ml SDE0.5 SDE0. 25 SDE0.125 SDE0.06 NPC Et ++++ - - - - - - - - - - - - - - 0.5Eu／ml 按中国药典:0.5λ≤ Es ≤ 2λ但 Et ＞2Es,干扰不成立。认为供试品在试验浓度下对凝胶反应有抑制作用. 按USP、EP:0.5λ≤ Es ≤ 2λ且0.5λ≤ Et ≤ 2λ 干扰成立。认为供试品在试验浓度下对凝胶反应无干扰作用. 第三十页，共四十四页，2022年，8月28日 十一、举例：某产品的干扰试验 1.试剂 试剂名称 厂家 规格 灵敏度或效价 数量 鲎试剂 湛江安度斯 0.1ml/支 0.25Eu/ml 36支 工作标准品 中国药品生物制品检验所 ------- 150EU/支 1支 BET水 湛江安度斯 50ml/瓶 ------- ------ PH调节剂 湛江安度斯 2ml/支 ------- 1支 某产品 ------- 100ml:0.4g ------- 1瓶 第三十一页，共四十四页，2022年，8月28日 细菌内毒素检查法 第一页，共四十四页，2022年，8月28日 一、基本概念 细菌内毒素与热原的关系 热原(Progen) 指临床上能使哺乳类动物产生热原反应的物质。关于热原的定义在学术上还有争论。 细菌内毒素(Endotxin) 革兰氏阴性细菌细胞壁的构成成分，具有多种生物活性，其化学结构是脂多糖(LPS)。 热原与内毒素的关系在学术上仍有争论，但在GMP的条件下，在药检的范畴里，内毒素是主要的热原物质，可以说无内毒素就无热原，控制内毒素就控制热原。 第二页，共四十四页，2022年，8月28日 一、基本概念 细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中的细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 细菌内毒素检查包括两种方式，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法为准。 第三页，共四十四页，2022年，8月28日 一、基本概念 细菌内毒素的量用内毒素单位(EU或IU)表示。 细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏 度复核、干扰试验及各种阳性对照。 第四页，共四十四页，2022年，8月28日 一、基本概念 细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml（用于凝胶法）或0.005EU/ml（用于光度测定法）且对内毒素试验无干扰的灭菌注射用水。 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。常用的方法是在250℃干烤30分钟以上，也可以采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。 试验操作过程应防止微生物的污染。 第五页，共四十四页，2022年，8月28日 二、细菌内毒素检查法(凝胶限量法) 细菌内毒素检查法（凝胶法）实验程序如下： 一、实验准备：试剂、仪器、及用具等 二、确定药品的细菌内毒素限值（L） 三、计算供试品的最大有效稀释倍数（MVD）或最低有效浓度（MVC） 四、鲎试剂灵敏度复核 五、药品与鲎试剂相容性的初筛试验 六、供试品干扰试验以及干扰试验的验证 七、供试品日常的内毒素限量检查。 第六页，共四十四页，2022年，8月28日 三、实验准备 1. 仪器、设备 37±1℃恒温水浴或适宜的恒温器具 2.器具：凡与供试品或试剂直接接触的器具必须经除热原处理（250℃干烤30min以上）;塑料用具须确证不干扰实验结果. 3.试剂 内毒素工作标准品、 鲎试剂、 鲎试验用水、 PH调节剂。 第七页，共四十四页，2022年，8月28日 四、确定药品的细菌内毒素限值（L） L =K/M L:供试品的内毒素限值,可从《药典》上查询或按以上公式计算,以EU/ml、EU/mg、EU/U表示 K:按照规定的给药途径,人体每公斤体重每小时可接受的最大内毒素剂量,以EU/(kg.h)表示; M:人体每公斤体重每小时最大用药剂量,以ml／(kg.h)、mg／(kg.h)或U／(kg.h)表示，中国人均体重按60公斤计算，人体表面积按1.62m2计算。按