灭菌和菌种保藏.pptxVIP

第1页/共29页灭菌和菌种保藏第2页/共29页第五章 灭　菌污染杂菌的危害1.消耗营养物质。2.分泌抑制发酵生长的有害物质。3.分泌严重改变培养液性质的物质。4.分泌抑制产物生物合成的有毒副作用的物质。5.产生破坏代谢产物的酶类。 轻者影响产量，重者导致全军覆没 要认真做好培养基、发酵设备、管道与附件的灭菌、空气除菌、严格控制生产操作第3页/共29页第五章 灭　菌第一节　灭菌的基本原理灭菌：是指用化学的或物理学的方法杀灭或除掉物料或设备中所有的有生命的有机体的技术或工艺过程。工业中常用的灭菌方法：　化学物质灭菌、热灭菌（包括干热灭菌和湿热灭菌）、辐射灭菌和过滤介质除菌。第4页/共29页第五章 灭　菌第一节　灭菌的基本原理一、几种常用灭菌方法的基本原理　(一)化学物质灭菌 甲醛、苯酚、高锰酸钾、洁尔灭、氯化汞、表面活性剂等 与微生物细胞中某种化学成分反应，如使蛋白质变性、酶类失活、破坏细胞膜通透性等。 生产中使用的培养基里含有蛋白质等营养物质亦易于与上述化学物质发生化学反应，同时药物加入培养基之后很难除掉。 所以不能用于培养基的灭菌，只能用于空间、设备、和器械的消毒灭菌。第5页/共29页第五章 灭　菌第一节　灭菌的基本原理一、几种常用灭菌方法的基本原理(二)辐射灭菌 是利用高能量的电磁辐射和微粒辐射来杀灭微生物。紫外线：有效波长2400-3000?，对微生物有高度致死效应，主要是与菌体核酸的光化学反应而造成菌体死亡。对营养细胞和芽孢均有效。但穿透力低，只适于表面灭菌。X射线和γ射线:使菌体内的水和有机物产生强烈的离子化反应，阻碍微生物代谢活动而导致菌体迅速死亡。虽然灭菌效果好，但穿透力强，不安全不经济。第6页/共29页第五章 灭　菌第一节　灭菌的基本原理一、几种常用灭菌方法的基本原理　(三)干热灭菌 指在干燥高温条件下，微生物细胞内的各种与温度有关的氧化反应速度迅速增加，使微生物的致死率迅速增高的过程。　一般160℃，1小时。　主要用于需要保持干燥的器械、容器的灭菌。第7页/共29页第五章 灭　菌第一节　灭菌的基本原理一、几种常用灭菌方法的基本原理　(四)湿热灭菌 是直接蒸汽灭菌，蒸汽冷凝时释放大量潜热，并具有强大的穿透力，在高温和水存在时，微生物细胞中的蛋白质极易发生不可逆的凝固性变性，短时间内杀死微生物。　经济快速，被广泛应用与工业生产。第8页/共29页第五章 灭　菌第一节　灭菌的基本原理二、湿热灭菌的原理 大多数微生物最适温度为25~27℃,维持生命活动的温度为5~50℃，当温度超过最高限温时微生物就会发生死亡。致死温度：杀死微生物的极限温度。致死时间：在致死温度下，杀死全部微生物所需要的时间。 微生物的营养体、芽孢和孢子的结构不同，对热的抵抗力也不同。　无芽孢菌在60℃保温10min即可全部被杀死。　芽孢要在100℃下保温10min到几小时才能被杀死。　嗜热细菌在120℃下仍可耐受20~30第9页/共29页第五章 灭　菌第一节　灭菌的基本原理热阻：指微生物在某一种特定条件下（主要是温度和加热方式）的致死时间。一般所指的灭菌是否彻底，是以能否杀死热阻大的芽孢杆菌为指标。第10页/共29页第五章 灭　菌第一节　灭菌的基本原理对数残留定律：微生物在灭菌过程中，是随时间逐渐死亡的，其减少速率(dN/dt)与一瞬间残留的菌数成正比。实际设计时常用Nt＝0.001即1000批次的灭菌中只有一批失败。相同条件下，不同微生物的K值是不同的，K值越小，热阻越大。第11页/共29页微生物营养成分第五章 灭　菌第二节　培养基和发酵设备的灭菌一、培养基的灭菌温度选择 用湿热灭菌方法对培养基灭菌时，加热的温度和时间对微生物死亡和营养成分均有破坏作用，因而选择一种既能达到灭菌要求又能减少营养成分被破坏的温度和受热时间，是研究培养基灭菌质量的重要内容。　 绝大多数培养基的营养成分的破坏和菌体死亡都属于一级分解反应。Arrhenius Equation: 反应速度常数增加的倍数第12页/共29页微生物营养成分第五章 灭　菌第二节　培养基和发酵设备的灭菌一、培养基的灭菌温度选择 随温度的升高，灭菌反应速度常数增加的倍数大于营养成分破坏反应速度常数增加的倍数。 Q10：温度升高10℃时的反应速度常数与原温度时的反应速度常数的比值。　一般的化学反应Q10为：1.5~2.1杀灭微生物营养体的反应Q10为：5~10　杀死芽孢时的反应Q10为：35 采用高温快速灭菌方法，即可达到杀死培养基中的全部微生物的目的，又可减少营养成分的破坏　芽孢VB2118℃, 15min99.99%10%120℃, 1. 5min99.99%5%第13页/共29页第五章 灭　菌第二节　培养基和发酵设备的灭菌二、培养基的灭菌方法　分批灭菌和连续灭菌（一）分批灭菌（实罐灭菌） 是将配置好的