医疗器械无菌和初始污染菌检验.pptVIP

灵敏度检查：????????????????????????????????????????? ????????菌种???培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus?? aureus)［CMCC（B） 26?003］ ?铜绿假单胞菌??? (Pseudomonas? aeruginosa)?［CMCC（B） 10? 104］ ?枯草芽孢杆菌??? (Bacillus? subtilis?)????????????????［CMCC（B） 63? 501］ ?生孢梭菌?????????(Clostridiumsporogenes)????????????[CMCC(B)?????????64? 941] ?白色念珠菌?????? (Candidaalbicans)???????????????????????[CMCC(F)?????????98?? 001]　 黑曲霉???????????(Aspergillus?? niger? )　　　　???[CMCC(F)?????????98?? 003] 培养基的适用性检查 第三十页，共六十八页，2022年，8月28日 培养基应符合无菌性检查及灵敏度检查的要求。检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。 灵敏度检查所用菌种 （药典2010版规定） 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉 分别接种各菌种新鲜培养物至相应培养基中培养，将培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成菌悬液（浓度小于100cfu/mL） 硫乙醇酸盐流体培养基（12mL）9支：分别接种小于100cfu的金葡、铜绿、枯草、生孢各2支，另一支不接种做空白对照，培养3天 改良马丁培养基（9mL） 5支：分别接种小于100cfu的白念、黑曲霉各2支，另1支不接种做空白对照，培养5天 逐日观察结果： 空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，则灵敏度符合规定。 第三十一页，共六十八页，2022年，8月28日 无菌检验有两种方法：直接接种法、薄膜过滤法 直接接种法:将供试品或其有代表性的各部分直接投放入培养基内培养。 薄膜过滤法:含抗菌、抑菌成分的供试品会抑制某些微生物的生长繁殖,所以用常规方法检查会出现假阴性的结果, 但并不等于产品中没有微生物甚至是致病性微生物。所以采用薄膜过滤法来去除供试品中可溶的抑菌性成分,把细菌等微生物截留在滤膜上,然后再经过处理培养使所含微生物生长繁殖, 从而使微生物检出。 方法验证试验 第三十二页，共六十八页，2022年，8月28日 当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若产品的组分或原检验条件发生改变时，检查方法应重新验证。 ??????验证时，按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。 方法验证试验 第三十三页，共六十八页，2022年，8月28日 菌种及菌液制备 ：除大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 4 4102〕外，金黄色葡萄球菌?、?枯草芽孢杆菌??、?生孢梭菌、?白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。 方法验证试验与灵敏度检验所有菌种区别：大肠埃希菌代替铜绿假单胞菌。 方法验证试验 第三十四页，共六十八页，2022年，8月28日 取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基中，或将培养基加至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。按规定温度培养3天~ 5天。各试验菌同法操作。 方法验证试验：薄膜过滤法 第三十五页，共六十八页，2022年，8月28日 方法验证所用菌种 （药典2010版规定） 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉 分别接种各菌种新鲜培养物至相应培养基中培养，将培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成菌悬液（浓度小于100cfu/mL） 硫乙醇酸盐流体培养基8支：分别接种小于100cfu的金葡、大肠、枯草、生孢各2支，其中1管接入每支培养基规定的供试品接种量，另1管作为对照，培养3天。 改良马丁培养基4支：分别接种小于100cfu的白念、黑曲霉各2支，其中1管接入每支培养基规定的供试品接种量，另1管作为对照，培养5天。 方法验证试验：直接接种法 第三十六页，共六十八页，2022年，8月2