C细菌革兰氏染色法.pptxVIP

C细菌革兰氏染色法第1页/共11页 油镜提高分辨率基本原理油镜与其他物镜的不同是载玻片与物镜之间是隔一层油质。如香柏油的折射率n=1.52，与玻璃相同。光线通过不减低视野的照明度；主要能增加数值孔径，提高显微镜的放大效能。 分辨率=λ/2NA λ=光波波长 （物镜的数值孔径值）NA=n×sinα α=镜口角的半数可知n（介质折射率）对提高显微镜的分辩力起着关键性的作用。第2页/共11页 革兰氏染色基本原理细胞壁的成分和结构不同而造成的。草酸铵结晶紫初染成蓝紫色，碘液媒染形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体中的滞留能力，两种细菌的脱色效果不同，蕃红复染。革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低，肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘-结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为无色，用复染剂（如番红）染色后又变为复染剂颜色（红）。第3页/共11页 细胞壁结构图第4页/共11页 实验用品菌种：大肠杆菌24 h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，枯草芽孢杆菌12 h～18 h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。试剂：