Kupffer细胞分离培养.pptxVIP

Kupffer细胞分离培养第1页/共20页 用镊子划碎肝组织第2页/共20页 装入试管消化第3页/共20页 肝脏消化吹打后细胞悬液第4页/共20页 细胞悬液过滤第5页/共20页 洗涤与肝细胞沉淀第6页/共20页 梯度离心Percoll原液9份加入1份PBS（10倍浓度）配成100%的SIP。取4支无菌离心管，沿着管壁加入2 mL 50％的SIP，然后倾斜（60o）试管，轻轻的沿着管加2mL25％的SIP细胞悬液（小鼠2管，大鼠4管）。500×g，离心15 min，4oC， 50％的SIP和25％的SIP层面之间有一层白色物，吸管轻轻的吸取之，置离心管中，用PBS离心清洗2遍，弃上清(300×g，5min)。第7页/共20页 非肝细胞SIP离心准备第8页/共20页 SIP离心后细胞层与洗涤第9页/共20页 细胞贴壁把细胞按5x105/ml浓度种植于培养板中，培养2h。取出培养板，用37℃的PBS液轻轻冲洗3次，去除未贴壁细胞，贴壁细胞即为实验所用的KCs。第10页/共20页 刚分离出的细胞第11页/共20页 KCs的培养方法培养 5％CO2、37℃、95％湿度。换液间隔时间为