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生化制药工艺技术基础第1页/共46页 2023/7/112第二节原料选择和预处理 原料选择的基本原则 ①要选择有效成分含量高的新鲜材料； ②来源丰富易得； ③制造工艺简单易行； ④成本比较低； ⑤经济效果要好。 第2页/共46页 2023/7/113第三节 原料的粉碎 一、 机械法 粉碎少量原料时，可使用高速组织捣碎机(10000r／min)、匀浆器、研钵等。工业生产上一般常用的粉碎设备有电磨机、球磨机、万能粉碎机，绞肉机、击碎机等。 二 、物理法 1．反复冻融法 ； 2．冷热交替法 ； 3．超声波处理法；4．加压破碎法 。 第3页/共46页 2023/7/114第三节 原料的粉碎三 、生化和化学方法 1．自溶法 2．溶菌酶处理法 3. 表面活性剂处理法 第4页/共46页 2023/7/115第四节 提 取 分固-液、液-液提取提取条件的选择：溶剂、PH值、温度影响提取的因素：被提取物质溶解度的大小、 扩散作用的影响、分配作用的影响超临界流体萃取： 第5页/共46页 2023/7/116第五节 分 离 纯 化 主要应用的方法有盐析法、有机溶剂沉淀法、pI沉淀法、膜分离法、层析法、凝胶过滤法、离子交换法等。一、盐析法 1.盐析及方法 利用不同蛋白质在高浓度的盐溶液中，溶解度不同程度的降低来进行分离纯化的方法。有Ks法和β法。 2.特点 对设备和条件要求低，安全，应用范围广泛。在高浓度盐存在下，蛋白质不易发生变化，一般可在室温下进行操作。 分辨率低， Ks法多用于提取液的前期分离工作。 第6页/共46页 2023/7/117第五节 分 离 纯 化一、盐析法 3.常用的中性盐和加入方式 常用中性盐有硫酸铵、硫酸镁、硫酸纳、氯化钠、磷酸钠等。硫酸铵的盐析能力强，饱和溶液浓度大，溶解度受温度影响小，一般不会使蛋白质变性，缺点是缓冲能力差，pH常在4．5—5．5之间。但价廉易得，分段分离效果也比其他盐类好。 加入方式：分步固体盐或饱和溶液 第7页/共46页 2023/7/118第五节 分 离 纯 化一、盐析法 4.盐析时应注意的问题 (1) 盐饱和度的影响；(2) pH的选择； （3）蛋白质浓度的影响；（4）温度的影响； （5）盐析沉淀物的脱盐； 第8页/共46页 2023/7/119第五节 分 离 纯 化二、有机溶剂沉淀法 利用不同蛋白质在不同浓度的有机溶剂中的溶解度差异而分离的方法，称有机溶剂沉淀法。乙醇和丙酮是最常用的有机溶剂。 有机溶剂沉淀法比盐析法分辨力强，沉淀也好过滤，但对有些生物活性物质能引起失活和变性。应用时还应注意防止溶剂挥发和火灾等。 第9页/共46页 2023/7/1110第五节 分 离 纯 化有机溶剂沉淀时应注意的问题 1 控制工艺过程的温度； 2 防止溶剂局部浓度过高； 3 及时处理沉淀物； 4 pH值的选择; 5 比盐析法条件严格; 第10页/共46页 2023/7/1111第五节 分 离 纯 化三、等电点沉淀法 等电点： 第11页/共46页 2023/7/1112第五节 分 离 纯 化三、等电点沉淀法 利用蛋白质在等电点时溶解度最低，而各种蛋白质又具有不同的等电点的特性进行分离的工艺过程，称等电点沉淀法。由于各种蛋白质在等电点时，仍有一定的溶解度而沉淀不完全，多数蛋白质的等电点又都十分接近，所以单独使用效果不理想，分辨力差，多用于提取后除杂蛋白，实际生产中常与有机溶剂沉淀法、盐析法联合使用。第12页/共46页 2023/7/1113第五节 分 离 纯 化四、膜分离法 膜分离技术包括超滤、反渗透析、电渗析、微孔过滤、气体渗析和超精密过滤等，其中超滤、反渗透析、微孔过滤和超精密过滤在医药领域中的应用较为常见。1．超滤 在液压（氮气或真空）驱动下，分离粒子的范围，一般为0．001一0．01μm（溶剂和小分子透过），适用于酶和蛋白质类生化药物的分离、浓缩、脱盐、提纯、除菌、除病毒和热原等。 第13页/共46页 2023/7/1114第五节 分 离 纯 化四、膜分离法 1．超滤第14页/共46页 2023/7/1115第五节 分 离 纯 化四、膜分离法 1．超滤 参数：膜（纤维素硝酸酯或醋酸酯、芳香酰胺纤维等）；水的流速；相对分子质量的截止值(截留分子量)。