浙江生物选修一生物技术实践知识点归纳.pdfVIP

谋事在人，成事在天！——《增广贤文》 选修 1 《生物技术实践》知识点归纳 实验 1 大肠杆菌的培养和分离 1 .微生物是指结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物，包括病毒、原核 生 物、原生生物和某些真菌。细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质， 无成型的 细胞核，只有一环状 DNA 分子（拟核）。以分裂（二分裂）的方式繁殖，分裂速度很快。 用革兰氏染色法 将细菌分为革兰氏阳性菌（革兰氏染液染色后，再脱色处理，细菌仍保留染色液的 颜色）和革兰氏阴性菌 两大类，区别在细胞壁的成分不同。大肠杆菌是革兰氏阴性（细胞壁薄，有 荚膜）、兼性厌氧的肠道杆 菌。 2 .细菌的分离方法有两种：划线分离法和涂布分离法。是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选 高表 达量菌株的最简便方法之一。划线分离就是用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板 上划线，在 划线的过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少，。划线最后，可使细菌间的距离加大。 将接种后的固体培 养基培养 10 20 小时后，一个细菌细胞就会繁殖成许多细菌细胞，形成菌落， 不会重叠。在斜面上划 〜 线，则每个斜面的菌群就是有一个细菌产生的后代。用于基因工程的大肠杆 菌的工程菌，可以用划线分离 法获得产物表达能力高的菌株。由于工程菌的质粒中通常有抗性基因 （如抗氨苄青霉素基因），如在培养基中加入一定量的氨苄青霉素，由于非工程菌的其他杂菌都没 有抗性 基因，所以在划线后只有存在抗性基因的工程菌能生存下来。 涂布分离时，需要先将培养的菌液稀释，通常稀释到 10 〜10 之间，然后去 0.1ml 不同稀释度的 稀释菌液 -5 -7 放在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度 下，可产生相互 分开的菌落。通常每个培养皿中有 20 个以内的单菌落为最合适。将每个菌落分别 接种在斜面上扩增培养 后，再做功能性实验。 划线分离法，方法简单；涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂。 3 .在培养微生物时，必须进行无菌操作。其首要条件是各种器皿必须是无菌的，各种培养基也必须 是无 菌的，转移培养基、倒平板、接种、平板划线、平板稀释涂布等操作中的每一步都要做到无菌 （防止杂菌 污染）。进行恒温培养时，要将培养皿倒置，是因为培养基中的水分会以水蒸气的形式 蒸发，倒放培养皿 会使水蒸气凝结成水滴后，落入培养基的表面并且扩散，菌落中的细菌也会随水 扩散，菌落见相互影响， 很难在分成单菌落，达不到分离的 目的。 4 .细菌扩大培养要用 LB 液体培养基 （通用培养基、常用于做生理学研究和发酵工业），划线分离要 用 LB 固体培养基 （常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存。”细菌喜荤，霉菌喜素”通常细 菌培养基 要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定的氯化钠，以维持一定的渗透压；霉菌培 养基一般用无机 物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。尽管培养基的配方各不相同，但其基本成分都一 样 （五类）。 人及动物的营养物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类； 植物的营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类； 微生物的营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及生长 因子等五类。 划分 培养基冲类 特点 用途 4.无菌技术 解淹 （1）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵， 液体培岸麻 不加扬固剂 工业小产 要注意以下几个方面： 梅理 半固体培养基 视察俄生物的运 动， ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁 分类■.鉴定 性质 加凝固剂- 如琼脂 和消毒。 送生物分离