次生代谢产物蕨藻红素的测定 高效液相色谱法征求意见稿.docx

ICS 07.080A 20/39 ICS 07.080 A 20/39 中华人民共和国国家标准 GB/T╳╳╳╳-201╳ 次生代谢产物蕨藻红素的测定 高效液相色谱法 次生代谢产物蕨藻红素的测定 高效液相色谱法 Determination of the secondary metabolic products of caulerpin——High performance liquid chromatography （征求意见稿） 2016.11 200×-××-××发布200×-××-××实施 200×-××-××发布 200×-××-××实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 次生代谢产物蕨藻红素的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了天然植物中蕨藻红素高效液相色谱测定方法的原理、试剂和材料、仪器和设备、操作步骤和结果分析。 本标准适用于天然植物中蕨藻红素含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 样品中加入乙醇-水溶液，经微波辅助提取，高效液相色谱-紫外检测器测定，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中二级要求。 4.1 85%（w/v）乙醇溶液 85%乙醇溶液：取850 mL无水乙醇，加150 mL水，混匀。 4.3 蕨藻红素标准品 纯度应大于等于98%。 4.4 0.5 mg/mL蕨藻红素标准品储备溶液 准确称取蕨藻红素标准品，用甲醇稀释配置成浓度为0.5 mg/mL的标准储备液，于-18 ℃保存，保存期为3个月。 4.5 标准工作液 根据需要，取适量的储备液，用空白样品提取液配制成适当浓度的标准工作液。标准工作溶液需现配现用。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器。 5.2 微波辅助萃取仪：配100 mL提取罐。 5.3 均质机：转速不低于10000×g。 5.4 粉碎机。 5.5 天平：感量0.01 g，0.01 mg。 5.6 有机相微孔滤膜：孔径0.22 μm。 6 操作步骤 6.1 样品处理 6.1.1 鲜样处理 鲜样：将新鲜样品或冷冻样品200g，用均质机匀浆后，搅拌均匀，密闭冷藏或冷冻保存； 6.1.2 干样处理 干样：取代表性样品约200g，用粉碎机粉碎均匀，过250 μm的筛，于室温下避光密闭保存。 6.2 提取 称取2.0 g鲜样（精确至0.01 g）或2.0 g干样（精确至0.01 g）置于100mL提取罐中，准确量取45 mL 85%乙醇溶液加入提取罐，进行微波辅助提取（提取条件参照附录B）。提取结束后冷却至室温，过滤，将滤液转入100 mL容量瓶，滤渣加入45 mL 85%乙醇溶液，重复提取一次，合并两次提取液，用5 mL 85%乙醇分两次清洗提取罐，过滤，滤液一并转入容量瓶中，用85%乙醇定容至刻度，混匀，吸取1 mL溶液过0.22 μm微孔滤膜，待测。 6.3 测定 6.3.1 高效液相色谱参考条件 a) 色谱柱：C18柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm，或性能相当者； b) 流动相：甲醇-水 (80:20，V/V)； c) 流速：流速0.8 mL/min； d) 紫外检测器：波长315 nm； e) 柱温：30 ℃； f) 进样量：10 μL。 6.3.2 色谱测定与确证 将标准工作溶液和待测溶液分别注入高效液相色谱中，以保留时间定性，以待测液峰面积代入标准曲线中定量，样品中蕨藻红素质量浓度应在标准工作曲线质量浓度范围内。标准溶液色谱图参见附录A。 6.4 空白实验 除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。 7 结果计算 试样中蕨藻红素的含量按照式（1）计算： ……………………………………………（1） 式中： X——样品中蕨藻红素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； ρ——有标准曲线求得试样溶液中蕨藻红素的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V——试样最终定容体积，单位为毫升（mL）； 1000——换算系数； m——称取试样的质量，单位为克（g）。 注：计算