复旦微生物学实验课件3 细菌和放线菌的个体形态观察.pdfVIP

实验 细菌和放线菌的个体形态观察 3 • 1 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 瓶 液体培养基150 mL+2.5 g琼脂 • 5支试管，加帽，包扎 • 1 生理盐水 瓶 水150 mL加NaCl 1.3 g 微 生 物 形状  球菌  杆菌  螺旋菌 • 球菌 球形或椭圆形 排列方式：微球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌和葡萄球菌 • 杆菌 • 螺旋菌 双球菌 四联球菌 八叠球菌 链球菌 葡萄球菌 • 球菌 球形或椭圆形， 排列方式：微球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌和葡萄球菌 • 杆菌 短杆、棒杆、梭状、分枝杆菌，单个或链状 • 螺旋菌 弧菌（不满一周）和螺旋菌 炭疽芽胞杆菌 大肠杆菌 双歧杆菌 1、革兰氏染色 涂片 • 挑一环水于洁净载玻片中央； • 无菌操作取金黄葡萄球菌，在水滴中涂布4~5周； • 灼烧环上残菌后，无菌操作取克雷伯氏菌，在水滴中反复涂布5圈 ×10，具体是从中央向外逐渐涂布5圈，然后再从中央向外涂布5圈。 将两种菌涂布均匀，成为直径约0.5 cm的菌膜。 • 杀灭环上残菌。  固定 • 载玻片在火焰上方来回过火数次，但要控制载玻片微热，不烫手，防 止过热，否则菌体聚集乃至变形严重。 • 固定不牢，染色过程中细菌会大量从载玻片上脱落，即载玻片上菌膜 必须干燥彻底。 染色 • 初染：加草酸铵结晶紫，染色1.5 min，弃去染色液后水洗，稍干； • 媒染：加路德尔碘液，1.5 min后弃去，水洗，稍干； • 脱色：滴加95％乙醇，稍摇动几下后马上弃去，重复1次，立即水洗； • 复染：加沙黄染液，染色2 min后弃去，水洗，用吸水纸轻轻吸干。 镜检观察，记录结果 正置光学显微镜结构 染色的细菌装片置于载物台上 低倍镜下寻找合适的视野 转换油镜到工作位置 聚光器升至最高，可变光栅开至最大，亮度调至最亮 油镜头下的载玻片处滴加1~2滴香柏油 油镜头浸入香柏油中，转动粗校准螺旋，使镜头与玻片相切 目镜观察，缓慢粗调至出现物像（降低载物台,禁止提升载物台） 细调至物像清晰，选取视野，记录结果 提升镜头或者降低载物台，聚光器降至最低位置 下降载物台，取下载玻片； 油镜保养 取擦镜纸，擦去镜头上香柏油；重复 至无油。 将4倍镜头转至工作位置 取擦镜纸，吸少量清洁剂，擦去残余 油迹，重复1次； 用擦镜纸检查，确认无油污。 关闭电源，将电源线绑好 放回显微镜，登记显微镜编 号、使用者和使用时间 金黄葡萄球菌和克雷伯菌革兰氏染色结果 油镜下观察，拍照或者绘图，少量紫色（＋）球菌和大量红色（－）杆 菌均匀分布为佳。 金黄葡 萄球菌