复旦微生物学实验课件8 酸奶中乳酸菌的分离和菌种保藏.pdfVIP

实验8 酸奶中乳酸菌的分 离和菌种保藏 主讲教师：王英明 复旦大学生物科学国家级实验教学示范中心 灭菌材料准备 每组MRS琼脂一瓶，150 mL ／瓶，倒十块平板 4 马铃薯葡萄糖半固体斜面 支 原理 酸奶牛奶或羊奶的乳酸菌发酵产品。 乳酸菌能发酵糖类产生乳酸的细菌。革兰氏阳性，杆菌或球菌，无芽孢。 巴斯德1857年发现乳酸菌引起葡萄酒变酸，发明巴斯德消毒法，拯救了法国的葡萄酒工业。 原理 梅契尼科夫1900年发现，保加利亚莫斯利安人长寿和常喝 酸奶有关，从酸奶中分离到保加利亚乳杆菌 ，创建酸奶工业。 乳酸菌的价值： 1. 营养价值：分解乳糖，产生乳酸。 2. 保健活性：调理肠胃，促进消化 3. 免疫调节活性。 益生菌（双歧杆菌等） 梅契尼科夫 合生元 益生元（寡聚果糖等） 酸奶中常用的乳酸菌 • 乳杆菌属：德氏乳杆菌，嗜酸乳杆菌，植物乳杆菌，鼠李糖乳杆菌（LGG）， 干酪乳杆菌 • 双歧杆菌属：两歧双歧杆菌，长双歧杆菌，婴儿双歧杆菌 • 链球菌属：嗜热链球菌 • 乳球菌属：乳酸乳球菌 鼠李糖乳杆菌 长双歧杆菌 酸奶中乳酸菌分离（MRS） GB 4789.35-2010食品微生物学检验 乳酸菌检验乳酸菌计数用MRS 原理 菌种保藏采用干燥、低温、缺氧等条件抑制微生物的新陈代谢和生长繁殖，长期保 持微生物的不乱、不死、不变。一般保藏纯培养，优先选择休眠体（芽孢和孢子）。 常用方法 适用菌种 保藏原理 备注 斜面保藏法 绝大多数 斜面培养物，4 ℃ 应换橡胶塞 半固体穿刺法 细菌和酵母菌 半固体穿刺培养物，4 ℃ 石蜡油/橡胶塞 甘油法（DMSO法） 绝大多数 菌悬液加甘油，-20/-80 ℃ *液氮法 绝大多数 加DMSO/液氮（-196 ℃） 最有效 砂土管法 休眠体 砂土管中加菌，干燥 低温，熔封更佳 滤纸片法 细菌、放线菌和真菌 滤纸片上加菌，干燥 低温，熔封更佳 *冷冻真空干燥法 绝大多数 菌液加保护剂，低温抽真空 4 ℃或室温保藏 冻干，熔封 材料和仪器 1. 菌种：市售酸奶。 2. 培养基：MRS琼脂培养基。 3. 试剂：厌氧指示条，变色硅胶，厌氧产气袋AneroPack-Anaero 2.5 L ，草酸铵结晶紫染 色液。 4. 设备：恒温培养箱，方形培养盒（2.5 L），显微镜。 5. 器皿等：煤气灯，电子点火器，载玻片，接种环，试管和无菌培养皿等。 实验步骤 1. 酵母菌的半固体穿刺接种 酒酿实验分离的酵母菌斜面，接种针取菌，穿刺接种，28 ℃培养3~4天，观察生长情况。 2