高中生物：2023届高三二轮复习生物：新情境微专题6：基因组编辑技术、PCR技术.docx

PAGE PAGE 2 2023届高三生物二轮复习新情境微专题6 基因组编辑技术、PCR技术 一、基因组编辑技术 【典例剖析】 例：CRISPR/Cas9基因组编辑技术源于对细菌抵御噬菌体的机理研究。细菌被特定噬菌体感染后,细菌Cas2会随机切断入侵的噬菌体DNA双链,并将切下的一个DNA片段①(原型间隔序列)插入CRISPR位点的重复序列中,构成新的间隔序列(由间隔序列和重复序列交替排列组成的基因序列),形成“免疫记忆”。当同种噬菌体再次入侵时,由CRISPR位点的新的间隔序列转录产生的crRNA便会将另一种蛋白质(如Cas9)准确带入入侵者的原间隔序列DNA处,并将之切断②,即“免疫灭杀”。CRISPR/Cas9基因组编辑技术中,sgRNA(单向导RNA)是根据靶基因设计的引导RNA,准确引导Cas9切割与sgRNA配对的靶基因DNA序列③,CRISPR/Cas9系统进行基因编辑时,对DNA序列中的原型间隔序列相邻基因序列具有较高的编辑效率,如图所示。回答下列问题: (1)细菌Cas2基因表达Cas2的过程需要细菌提供　　　　　　　　　　　等原料,Cas2和Cas9在功能上都属于　　　　　　　,可催化　　　　　　　　(填化学键)水解。? (2)CRISPR/Cas9系统中的sgRNA与细菌体内的　　　　　　　功能相同,都可以与相应靶基因序列发生碱基互补配对。细菌利用该防御机制可以有效抵抗噬菌体的二次入侵,但是仍然会有部分噬菌体能够继续侵染已经获得免疫能力的宿主菌,原因可能是　 　。? (3)CRISPR/Cas9基因组编辑技术存在一定的脱靶效应:正常情况下,sgRNA通过20个核苷酸长度的引导序列与目标DNA序列发生碱基互补配对准确识别需要编辑的位点,然而有时会发生第18~20个碱基不匹配的情况④,此时,Cas9可通过一个手指状的结构紧紧抓住错配区稳定住RNA-DNA双链⑤,从而为Cas9切割DNA铺平道路,但这可能会导致Cas9在错误的基因位点切割双链DNA,从而引发潜在风险。请就如何降低脱靶效应,提出可能的思路:?　 。 (4)研究证实,人低氧诱导因子(HIF-1α)表达水平与肝癌的发生发展具有密切关系,HIF-1α在肝癌细胞中的表达水平明显高于正常肝细胞⑥,使用CRISPR/Cas9基因组编辑技术敲除HIF-1α基因为肝癌治疗提供了新途径。科研人员构建了靶向HIF-1α基因的CRISPR/Cas9重组质粒,并用重组质粒对肝癌细胞进行转染,利用其敲除肝癌细胞中的HIF-1α基因,并通过12孔板筛选获得了基因敲除的混合克隆细胞株,然后用HIF-1α表达诱导剂(CoCl2)诱导相关细胞,提取蛋白,用Westernblot法(分离检测蛋白质的一种方法)检测HIF-1α蛋白的表达,以相应条带灰度值(越大)表示表达水平(越高)⑦。下图为三类细胞HIF-1α蛋白的检测结果: 请尝试分析图示实验结果及结论:　 。? [思维流程] 问题 思维落点　　　 情境扫描 信息解码 (1)题 第2空 限制酶的作用 ①② 切断DNA片段 (2)题 第1空 向导作用 ②③ 准确引导 (3)题 基因编辑技术的准确性 ④⑤ 碱基不匹配,稳定双链 (4)题 转染CRISPR/Cas9重组质粒的细胞切除了HIF-1α基因 ⑥⑦+图 灰度值越大,基因表达水平越高 【解析】(1)基因表达包括转录和翻译两个过程,转录是指在细胞核中,通过RNA聚合酶以DNA的一条链为模板合成RNA的过程;翻译是指游离在细胞质中的各种氨基酸,以mRNA为模板合成具有一定氨基酸顺序的蛋白质的过程。因此细菌Cas2基因表达Cas2的过程需要细菌提供核糖核苷酸和氨基酸等原料。由题意可知,Cas2和Cas9都能切割DNA,属于限制性内切核酸酶,简称限制酶。限制酶能切割DNA分子,催化磷酸二酯键水解。(2)分析题意可知,CRISPR/Cas9系统中的sgRNA能够与DNA杂交,其功能与细菌体内的crRNA相似。细菌“免疫记忆”能够切割噬菌体的DNA,若其功能失效,可能是细菌体内的crRNA不能正确识别噬菌体的DNA,即噬菌体的DNA中的原型间隔序列发生基因突变,导致CRISPR位点形成的crRNA无法对其进行识别,进而导致Cas9不能切割噬菌体的DNA。(3)由题意可知,sgRNA通过20个核苷酸长度的引导序列与目标DNA序列发生碱基互补配对准确识别时,由于第18~20个碱基不匹配,Cas9可通过一个手指状的结构紧紧抓住错配区稳定住RNA-DNA双链,导致错误切割,故sgRN