微生物遗传与菌种选育新详解演示文稿.pptVIP

（4）选用最适剂量 剂量以诱变剂浓度和处理时间来表示 合适剂量：能扩大变异幅度又能促使 变异移向正变范围的剂量 当前第84页\共有136页\编于星期四\17点 （5）充分利用复合处理的协同效应 两种或多种诱变剂先后使用 同种诱变剂重复使用 两种或多种诱变剂同时使用 当前第85页\共有136页\编于星期四\17点 （6）利用和创造形态，生理与产量间的相关指标 淀粉酶变色圈试验 变色圈大的为淀粉酶高产菌落 当前第86页\共有136页\编于星期四\17点 在琼脂平板上，通过观察测定某突变菌落周围 蛋白酶水解圈的大小、 淀粉酶变色圈（用碘液使淀粉显色）的大小， 氨基酸显色圈（将菌落用打孔机取下，转移到滤纸上，再用茚三酮试剂显色）的大小， 柠檬酸变色圈（可在厚滤纸上培养，用溴甲酚绿作指示剂）的大小， 抗生素抑制圈的大小， 指示菌生长圈的大小（测定生长因子产生）， 纤维素酶对纤维素水解圈（用刚果红染色）的大小， 外毒素的沉淀反应圈的大小等， 均可为初筛工作中估计某突变株代谢产物量的“形态”指标。 当前第87页\共有136页\编于星期四\17点 （7）设计或采用高效筛选方案或方法 设计简便、高效的科学筛选方案。 初筛 筛选工作 复筛 以量为主（选留较多有生产潜力的菌株） 以质为主（对少量潜力大的菌株的代谢产物量作精确测定） 当前第88页\共有136页\编于星期四\17点 一个出 发菌株 诱变剂 处理 选出200个单 孢子菌菌株 初筛 （每株1瓶） 选出50株 复筛 （每株4瓶） 选出5 株 第一轮 第二轮 五个出发菌株 初筛 （每株1瓶） 选出50株 复筛 （每株4瓶） 选出5 株 40株 40株 40株 40株 40株 诱变剂 处理 当前第89页\共有136页\编于星期四\17点 初 筛 复 筛 对产量突变株生产性能的测定方法 粗测为主 在培养皿平板上 在摇瓶中 （8）创造新型筛选方法 较精确的测定 摇瓶培养or台式自控发酵罐培养 当前第90页\共有136页\编于星期四\17点 3. 突变株的筛选方法 (p212） 高产突变菌株的筛选方法 抗性突变体的筛选方法 营养缺陷型的的筛选方法 与突变株的筛选相关的几个概念 当前第91页\共有136页\编于星期四\17点 （1）产量突变株的筛选 1971年，国外有人报道了筛选春日霉素（kasugamycin，即“春雷霉素”）生产菌时所采用的一种 琼脂块培养法，一年内曾使该抗生素产量提高10倍。 当前第92页\共有136页\编于星期四\17点 此法的关键是用打孔器取出含有一个小菌落的琼脂块作分别培养。这样，各琼脂块所含养料和接触空气面积基本相同，且产生的抗生素等代谢产物不致扩散出琼脂块外。 数据精确，效率高 当前第93页\共有136页\编于星期四\17点 （2）抗药性突变株的筛选 基因突变使菌株对某种或某几种药物，特别是抗生素，产生抗性。 特点： 正选择标记 （突变株可直接从抗性平板上获得-----在加有相应抗生素的平板上，只有抗性突变能生长。所以很容易分离得到。） 当前第94页\共有136页\编于星期四\17点 梯度平板法（gradient plate）是 定向筛选抗药性突变株 的一种有效方法，通过制备琼脂表面存在药物浓度梯度的平板、在其上涂布诱变处理后的细胞悬液、经培养后再从其上选取抗药性菌落等步骤，就可定向筛选到相应抗药性突变株。 当前第95页\共有136页\编于星期四\17点 梯度平板法（gradient plate） 是定向筛选抗药性突变株的一种有效方法。 当前第96页\共有136页\编于星期四\17点 表示方法： 所抗药物的前三个小写斜体英文字母加上“r”。 strr strs 对链霉素的 抗性 敏感性 当前第97页\共有136页\编于星期四\17点 特点： 非选择性突变 突变株和野生型菌株均可生长，但可从形态特征上进行区分。 当前第52页\共有136页\编于星期四\17点 举例： 菌落颜色变化 β半乳糖苷酶基因的插入失活 重组子菌落 白色 非重组子菌落 兰色 当前第53页\共有136页\编于星期四\17点 5. 抗原突变型（antigenic mutant） 指由于基因突变引起的细胞抗原结构发生的变异类型，一般也属 非选择性突变。 例如，细胞壁缺陷变异（L型细菌等）、 荚膜或鞭毛成分变异等。 当前第54页\共有136页\编于星期四\17点 6. 产量突变型（metabolite quantitative mutant） 通过基因突变而产生的在代谢产物产量上明显有别于原始菌株的突变株，称为 产量突变型。 “正变株”（plus-mutant） 产量 高于 原始菌株 “负变株”（minus