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- - 柱层析和薄层层析实验报告 篇一：柱层析实验报告 柱层析别离色素 一、【实验目的】 1 ．了解柱层析的分类，掌握各种柱 层析的原理。 2 ．熟练掌握吸附层析的原理和操作 技术。 二、【实验原理】 叶绿体色素是植物吸收太能进展光 合作用的重要物质，主要有叶绿素 a、叶 绿素 b 、 胡萝卜素和叶黄素组成。从植物叶 片中提取和别离叶绿体色素是对其认识 和了解的前提。利 用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特 性，可用 95% 乙醇或无水乙醇提取。 别 离色素的方法有多种，如纸层析、柱层 析等。柱层析法是色谱法中的一种，它 是根据 混合物中各组分对固定相的吸附能 力，以及对洗脱剂〔即移动相〕的溶解 - - word.zl- - 度不同将各组分分 - 离。常用的柱色谱有吸附色柱谱和 分配柱色谱两类。 吸附柱色谱通常是在 玻璃管中填入外表 积很大，经过活化的多孔性物质或 粉状固体作为吸附剂〔如氧化铝或硅 胶〕，当混合物的溶液 流经吸附柱时，就被吸附在柱的上 端，然后从柱顶参加溶剂〔洗脱剂〕洗 脱。由于不同化合 物在吸附柱上的吸附能力不同，在 同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组 分随溶剂以不同速 度下移，形成色带。继续用溶剂洗 脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先 流出，整个层析过 程进展反复的吸附-解析-再吸附-再 解吸。用柱层析法可以分别收集各组分， 并逐个鉴定。 本实验是把三氧化二铝填 入玻璃管中〔压成柱状〕作为吸附剂， 将叶绿体色素的石油醚 提取液倾 于吸附柱上，色素即被吸 附。由于色素的种类不同，被吸附的强 弱不同，就在吸附 柱上排列成为不同的色层，再利用 - - word.zl- - - 吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力， 用不同的溶剂进展 洗脱，从而到达叶绿体主要的 4 种 色素〔叶绿素 a、叶绿素 b 、叶黄素、胡 萝卜素〕的别离。 三、【实验材料】 原料： 新鲜的菠菜叶 试剂 ： 1 ． 无水乙醇或 95% 乙醇 5.三氧化 二铝 2 ． 石英砂 6 ．饱和氯化钠溶液 3 ． 丙酮 7.水硫酸钠 4 ． 石油醚〔60-90℃〕 8 洗脱液： 丙酮：石油醚＝1 ：9 器材 ：层析柱〔1 ×30cm 〕， 研钵， 蒸馏装置， 脱脂 棉， 天平， 烧杯，过滤漏斗，玻璃 棒， 锥形瓶， 分液漏斗， 试管 ，铁 架台 四、【实验操作】 1 ． 色素的提取： 20 克菠菜，加少许石英砂，再加 20 毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，