纸层析法分离鉴定氨基酸.pptVIP

纸层析法分离鉴定氨基酸 第一页，共十页，2022年，8月28日 将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配。由于分配系数（Kd）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用比移值（Rf）来表示。 所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值。如图 第二页，共十页，2022年，8月28日 第三页，共十页，2022年，8月28日 在一定条件下（如温度、展层剂的组成、层析纸质量等不变），某种物质的Rf 值是常数，因此可作为定性依据。 由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。本实验利用纸层析法分离氨基酸。 第四页，共十页，2022年，8月28日 三、操作 1. 在层析缸中装入展层剂，其高度约1.5～2cm。 2. 准备滤纸: 戴上手套，取层析滤纸（长22 cm、宽14 cm）一张，在纸的一端距边缘3cm处用铅笔画一条直线，在此直线上每间隔2cm作一记号，为点样位置（即原点），如图。注意事项：手不能直接接触滤纸；直线与底边平行。 3. 点样：用毛细管依次将Lys(赖) 、 Gly(甘) 、 Pro(脯)、Val (缬)