实验植物的组织培养.pptVIP

快速繁殖 植物组织培养技术有何意义？ 当前第1页\共有30页\编于星期三\22点 我国用花药培养法先后培育出优质高产的经济作物、粮食和蔬菜等新品种，广泛应用于果树和花卉的快速繁殖。 借助于组织培养生产人工种子，解决某些作物品种繁殖力差、结子困难或发芽率低等问题。 当前第2页\共有30页\编于星期三\22点 生产药物、食品添加剂、香料、色素和杀虫剂等。例如：紫杉醇，生物碱、紫草素等。 转基因植物的培育 植物去病毒 当前第3页\共有30页\编于星期三\22点 实验：菊花的组织培养 当前第4页\共有30页\编于星期三\22点 当前第5页\共有30页\编于星期三\22点 当前第6页\共有30页\编于星期三\22点 （用于配置发芽和生根培养基） 当前第7页\共有30页\编于星期三\22点 当前第8页\共有30页\编于星期三\22点 当前第9页\共有30页\编于星期三\22点 当前第10页\共有30页\编于星期三\22点 植物组织培养用的培养基，含有植物生长发育所需要的各种营养物质，这些营养物质同样为细菌等微小的生物提供了适合的营养。在这种培养基上，细菌等微小的生物比植物细胞具有更强的新陈代谢能力，它们比植物细胞生长、繁殖得更快，而且它们会产生毒素，使培养的植物细胞很快中毒死亡。因此，植物组织培养要想取得成功，必须有效地防止细菌等的污染，保证培养材料、培养基、培养用具完全无菌。为了达到这一要求，就要在植物组织培养过程中进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作。 当前第11页\共有30页\编于星期三\22点 实验材料用具 培养瓶、镊子、超净台、灭菌锅、封口膜和橡皮圈、有棉球的广口瓶、酒精灯、三角漏斗、培养皿 MS培养基 萘乙酸、苄基腺嘌呤 发芽培养基 生根培养基 当前第12页\共有30页\编于星期三\22点 制备MS固体培养基 外植体消毒 接种 生芽 定 植 五、实验过程 移栽锻炼 生根 　　注意：对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。 当前第13页\共有30页\编于星期三\22点 （一）制备MS固体培养基 1、配制母液 按照MS培养基成分表, 分别配制培养基的母液。 (1)大量元素母液(10倍液) 分别称取10倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约800ml热的（60-80℃）蒸馏水中。（一种成分完全溶解后再加入下一种，最后加水，定容至1000ml后装入试剂瓶中，冰箱内贮存备用）。 (2)微量元素母液(100倍液) (3)铁盐母液（100倍液） (4)有机成分母液(100倍数) (5)生长素母液 (6)细胞分裂素母液 注意:配制培养基时，一定要注意调节pH。 当前第14页\共有30页\编于星期三\22点 MS培养基配制方法 返回 当前第15页\共有30页\编于星期三\22点 　　你能说出各种营养物质的作用吗？同微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？ 问题思考 　微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。 微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。 当前第16页\共有30页\编于星期三\22点 （1）把装好的培养基的三角瓶放入高压灭菌锅中，盖好锅盖。 （2）设置灭菌温度参数为121℃，20min，开始灭菌。 2、灭菌 无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键． 当前第17页\共有30页\编于星期三\22点 （二）外植体（离体组织）消毒 　　注意：对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。 1、70﹪酒精中浸泡10min，无菌水冲洗 2、5%次氯酸钠溶液中浸泡，无菌水冲洗 3、用另一5%次氯酸钠溶液浸泡5min，无菌水冲洗 4、超净台中用无菌水多次冲洗 当前第18页\共有30页\编于星期三\22点 （三）切段后接种 1、先用肥皂洗手，穿上工作服，戴上口罩和工作帽。 2、放入培养瓶和灭菌后的接种用具(镊子、解剖刀、接种针)，把镊子、解剖刀、接种针插入内盛70%酒精的广口瓶中。 当前第19页\共有30页\编于星期三\22点 3、在酒精灯火焰旁，打开三角瓶，把花茎用无菌解剖刀切成几段，每段至少有一张叶片 4