第六章基因的转移与重组体的筛选和鉴定详解演示文稿.pptVIP

当前第1页\共有22页\编于星期三\10点 优选第六章基因的转移与重组体的筛选和鉴定 当前第2页\共有22页\编于星期三\10点 （一） 直接连接 T4 DNA连接酶虽然能连接平末端，但效率很低，只有粘性末端的1~10%。 5’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ 3’ -OH -OH -P -P P- P- HO- HO- 5’ 3’ -OH -P P- HO- 5’ 3’ 二、平末端（blunt end）的连接 当前第3页\共有22页\编于星期三\10点 （1）同聚加尾法 （二） 人工加尾形成 “粘性末端” DNA末端转移酶能在没有模板的情况下给DNA的3’-OH端加上脱氧核苷酸。 ① 原理： 分别给载体和插入片断加上互补的核苷酸。 ② 加尾－碱基互补 当前第4页\共有22页\编于星期三\10点 ④缺点： ③优点： 能把任何片段连接起来 操作繁琐； 外源片段难以回收； 同聚物尾巴影响外源基因表达。 非酶切位点 当前第5页\共有22页\编于星期三\10点 （2）衔接物（linker）连接 Linker： 用化学合成法合成的一段10-12bp的，具有一个或数个限制性内切酶识别位点的平末端双链寡核苷酸 GGAATTCC CCTTAAGG EcoR I linker： （二） 人工加尾形成 “粘性末端” 当前第6页\共有22页\编于星期三\10点