基因诊断详解演示文稿.pptVIP

* 可以准确、快速、无损伤地分离出纯净的特定细胞或组织，保持细胞内生物分子的完整性，以便用于后续的DNA、RNA和蛋白质分析。 配有近红外激光(波长810nm)；紫外激光(波长349nm)；红色、绿色、蓝色三种荧光滤光片。 美国Arcturus公司的Veritas激光捕获显微分离仪 * 当前第31页\共有52页\编于星期三\2点 PICS?Altra?II流式细胞仪(分析分选) * * 当前第32页\共有52页\编于星期三\2点 * (七)DNA序列测定 该法是基因诊断所有的技术方法中最准确最可靠的—种。缺点：费时、费力、费用高。 * * 二、基因诊断的主要技术方法 当前第33页\共有52页\编于星期三\2点 * (一)点突变的检测 三、常见的基因异常及其检测 (二)大片段核苷酸丢失或插入的检测 (三)基因重排的检测 (四)基因扩增的检测 (五)DNA多态性的检测 (六)基因表达异常的检测 (七)病原体基因的检测 * * 当前第34页\共有52页\编于星期三\2点 * (一)点突变的检测 狭义的点突变指碱基替代，分为单点突变和多点突变；广义的点突变还包括少数核苷酸的缺失或插入。 1.已知点突变的检测 突变位点已被阐明的遗传病，可采用PCR等位基因特异性寡核苷酸杂交(PCR/AS0H)检测。 * * 三、常见的基因异常及其检测 当前第35页\共有52页\编于星期三\2点 * PCR/AS0H 检测: (1)根据突变点上下游的序列设计合成引物，PCR 扩增出突变区的DNA片段。 (2) 将PCR产物用斑点或狭缝点样器点在尼龙膜上，以紫外线照射固定。 (3) 针对上述每种突变位点，分别合成 2个寡核苷酸探针；其中一个具有正常的碱基序列，另一个则具有突变的碱基序列。 (4)分别预杂交、杂交、洗膜、放射自显影或显色。 (5) 分析正常探针及突变探针分别杂交得到的显影或显色图谱，即可作出基因诊断 * 当前第36页\共有52页\编于星期三\2点 * N：正常基因；H：杂合子基因；M：突变基因 ASO1 ASO2 N H M (PCR/AS0H 检测示意图) * 当前第37页\共有52页\编于星期三\2点 基因诊断详解演示文稿 当前第1页\共有52页\编于星期三\2点 （优选）基因诊断 当前第2页\共有52页\编于星期三\2点 * 基因诊断通常是指利用分子生物学的方法技术，直接检测体内DNA的结构变异或RNA的水平变化，从而对疾病作出诊断的方法。 一 、基因诊断的概念和特点 （一）概念 适用于遗传性疾病、感染性疾病、肿瘤等多种疾病的诊断，以及个体识别和亲子鉴定等法病学领域。 * 当前第3页\共有52页\编于星期三\2点 * （二）特点--以已知基因作为检测对象 （l）特异性强：直接检测导致疾病发生的基因变化； （2）灵敏度高：所采用的分子杂交和聚合酶链反应 等技术都具有信号放大作用； （3）取样便利：一般不受组织或时相的限制； （4）早期诊断：易在疾病尚无临床表现时作出诊断； （5）应用广泛：可检测自体基因和外源基因。 * 一 、基因诊断的概念和特点 当前第4页\共有52页\编于星期三\2点 (一)核酸分子杂交（NA hybridization） (二)聚合酶链式反应（PCR）技术 (三)单链构象多态性分析（SSCP） (四)DNA分子多态性（DNA polymorphism）分析 (五)限制性片段长度多态性（RFLP）分析 (六)显微切割（microdissection）技术 * (七)DNA序列测定（DNA sequencing） 二、基因诊断的主要技术方法 * * 当前第5页\共有52页\编于星期三\2点 * (一)核酸分子杂交 4.DNA 芯片(DNA chip)技术 Southern/DNA印迹、Northern/RNA印迹 (第七/六章)和Western/蛋白质印迹(第九/二章) 其他杂交方法: 1.斑点印迹(dot blotting)与狭缝杂交 2. 组织原位杂交(tissure in situ hybridization ) 3. 等位基因特异性寡核苷酸杂交 (allele-specific oligonucleotide hybridization, ASOH) * 二、基因诊断的主要技术方法 当前第6页\共有52页\编于星期三\2点 * 1.斑点印迹(dot blotting)杂交 将核酸(DNA或RNA)样品点在NC膜上，变性后与标记探针结合，显影或显色，密度测量，与对照品比较确定所测核酸量的高低。 方法： 应用： 主要用于检测细胞基因拷贝数的变化