荧光染料选择和数据分析演示文稿.pptVIP

复合荧光染料 Fluorescence Resonance Energy Transfer Intensity Wavelength Absorbance DONOR Absorbance Fluorescence Fluorescence ACCEPTOR Molecule 1 Molecule 2 当前第30页\共有73页\编于星期四\10点 荧光染料 多色分析 当前第31页\共有73页\编于星期四\10点 荧光素的选择原则 当前第32页\共有73页\编于星期四\10点 选择荧光素需要考虑 抗原的密度 高表达的抗原可选择几乎所有的荧光素 低密度表达的抗原需要可提供较高S/N比值的荧光素如PE/APC 当前第33页\共有73页\编于星期四\10点 选择荧光素需要考虑 自发荧光 每种细胞群都有不同水平的自发荧光 所有的荧光通道均可观察到自发荧光，但自发荧光强度在波长较长时迅速降低。 对自发荧光较强的细胞，选择发射波长长的荧光素（如APC）可得到较好的S/N比值。 对自发荧光比较弱的细胞，发射波长长的荧光素对S/N提高没有明显的改善。可选用FITC。 当前第34页\共有73页\编于星期四\10点 选择荧光素需考虑 非特异结合 许多荧光抗体可产生低水平的非特异结合，使阴性细胞群的荧光超出自发荧光。 非特异结合由下列因素引起 单克隆抗体的同型抗体：一些IgG同型抗体可能与一些细胞上的F