DB23-T1122-2007异黄酮制品中总大豆异黄酮含量的测定 紫外分光光度法.pdf

ICs 00.000. 0LC 67.2 -0X00DB23备案号：黑龙江省地電方标准DB23/T **7-2006异黄酮制品中总大豆异黄酮含量的测定紫外分光光度法Method for Determination of Tatal Soybean Isoflavone in Isoflavone Products(UV)-实施黑龙江省质量技术监督局发布 DB××/T ×××××××x目次前言1. 范围2原理3试剂4.仪器设备5操作步骤6结果计算7精密度 DB××/T ××××××××前言本标推于．年·月首次发布。本标准由黑龙江省质量技术蓝督局提出。，标准起草单位：哈尔滨医科大学公共卫生学院起草。本标准主要起草人：王路“崔洪斌。 DB×x/T ×××x--xxxx异黄酮制品中总大豆异黄酮含量的测定紫外分光光度法1 范围本标准规定了异黄酮制品中总大豆异黄酮含量的紫外分光光度测定方法。本本标准适用于异黄酮制品中总大豆异黄酮含量的测定；本标准的检出限为0.1!么，线性范围为0~～，8. 0 μ g/ mL..2原理样品中的总大豆异黄酮经溶剂提取、皂化处理后，用紫外分光光度计在261nm波长下测其吸光度。将测得的吸光度与粱料木黄酮标准系列溶液的吸光度进行比较，再乘以校系数，就可计算出样品中总大豆异黄酮含量。3试剂a）乙醇：.分析纯;b）冰乙酸：分析纯；c）75%乙醇溶液：乙醇：水（75：25）（V/V）：d）无水乙醚：分析纯：e）染料木黄酮标雅品：纯度≥99%;f）染料木黄酮标推储备溶液：称取适量染料木黄酮标推品润75%乙醇溶解、定容，配制成相当子染料木黄酮浓度为200μg/mL的储备溶液：g）氢氧化钠溶液（2mo1/L）：称取8g氢氧化钠，加水溶解后稀释至100mL。4仪器设备a）紫外分光光度计：测定波长261nm，使用1cm比色Ⅲ；b）分析天平（0.0001g）；c）离心机;d）水浴振荡器。5操作步骤5.1样品处理推确称取磨碎的样品1.0g（精确至0.01.g），加入40ml:75%乙醇，在65℃水浴中振摇2h，冷却至室温，加入2mol/L氢氧化钠溶液3ml，振荡20min，加入1mL冰乙酸，摇匀，以3000r/min离心10min，上清液转移至50mL容量瓶中，以75%乙醇定容到刻度，混合均匀，此溶液为样品测定液（含脂类样品需先用艺萃取脱脂）。5.2染料木黄酮标准曲线推确吸取染料本黄酮标准储备溶液 0.00 ml、0.05ml、0.10mL、0.15 mL、0.20 ml、0.30 ml0.40 mL（相当于含染料木黄酮量0.00 lg/ml、1.00μg/ml、2.00 μg/mL、3.00 μg/ml、4.00μg/mL、6.00μg/mL、8.00μg/ml），分别置于10mlL容量瓶中，用75%乙醇溶液稀释至刻度，充分摇勾。在紫外分光光度计261nm处测定吸光度。以吸光度以对染料木黄酮含量绘制标准曲线。5.3样品测定样品在紫外分光光度计261mm处测定吸光度，以吸光度通过标准曲线及校正系数计算样品溶液中总大豆异黄酮的含量。 XXXX--XXXX 1/XXHC6 结果计算大豆异黄酮含量（X）按式（1）计算：C×V× K ×1000XIm× 1000式中:X-样品中总大豆异黄酮含量，μg/kg:C-由标准曲线得出的样品中总大豆异黄酮浓度，μg/mL：样品提取液体积，mL；K— 稀释倍数;样品质量，g：: mF_一校正系数。发异黄酮制品为！：非发酵异黄酮制品为1.5。计算结果保留三位有效数字。7精密度