DB37T 337-2003蜂蜜中花粉种类及含量的检测方法.pdf

ICS 67.180.10B04DB37山長东省地方标准DB37/T 3372003蜂蜜中花粉种类及含量的检测方法Inspection method of species and content of pollen in honey2003-01-24发布2003-02-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 3372003前言本标准由中华人民共和国山东出入境检验检疫局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局。本标准起草人：李戈。 DB37/T 337—2003蜂蜜中花粉种类及含量的检测方法1范围本标准规定了蜂蜜中花粉种类及含量的检测方法本标准适用于蜂蜜中花粉种类及含量的检测。2检测方法2.1仪器和试剂2.1.1仪器a)离心机：1500转/min:b）显微镜：1000倍：c）离心管：100mL:d)天平：感量0.01ge）载玻片：25.4mm×76.2mm;f）盖玻片：18mm×18mm;g）量筒、烧杯、漏斗、培养皿、玻璃棒、酒精灯、锻子，2.1.2试剂a）甘油、石炭酸、冰醋酸、浓硫酸、乙酸酐：分析纯：b）动物胶：生化级：c）蒸馏水：本实验中用水均为蒸馏水。2.1.3试剂配制a）甘油胶：将1g动物胶放入6mL水中浸泡1h～2h，待其溶化后加入7mlL甘油，加热，轻轻搅拌，待完全均匀后用多层纱布过滤于培养皿中冷却凝固：b）乙酸酐和硫酸混合液：量取27mL乙酸酐于烧杯中，沿烧杯壁倒入3mL浓硫酸，用玻璃棒搅拌混合均勾备用（临用时配制）。2.2检测步疆2.2.1样品处理用烧杯称取混样品10g50g（每个样品进行双试验，取样量应根据各种蜂蜜中花粉多少适当增减，要求平均每个视野中花粉粒数约4粒～8粒为宜），用水溶解后移入100mL离心管中，加水至80ml摇勾，以1000转/min离心20min，弃去上层溶液，再加80mL水洗1次，沉淀离心，方法同上，上清液倒出之后将离心管倒置，使管内水尽量流尽，约剩下0.05mL试样备用。2.2.2试样制片将一小块甘油胶放在载玻片上，稍加热溶化，用玻璃棒取出少量试样放于甘油胶上，然后将盖玻片在酒精灯上稍加热后迅速盖上（注意避免出现气泡），应如此制做三个平行样。2.2.3花粉观察将制好的花粉载玻片置于显微镜下观察，前后左右移动载玻片，对照花粉标准图谱鉴定出花粉种类。三个平行样共观紧40个视野，记求每个视野的花粉总数和目标花粉粒数，花粉总数在100粒以上，实验有效。2.2.4分解验证按照2.2.1所述方法将蜂蜜中花粉提取于离心管中，先用10mL冰醋酸浸泡1h～2h，离心弃去乙酸，1 DB37/T 3372003再加入配制的乙酸酐和硫酸混合液5ml，置水浴中煮沸2min～3in（如果花粉壁较薄，加入混合液不需煮沸，浸泡即可）在分解过程中可随时麓取少量分解液于载玻片上，置显微镜下观察花粉原生质，直到分解完全为止。然后离心10min以上（1000转/min)，弃去分解液，再加入适量热水洗二次，分别离心弃去上层水，加入50%甘油和1%石炭酸各1滴备用。将此试样按照2.2.2所述方法制成载玻片，按照2.2.3在显微镜下观察计数。3计算花粉含量按下式计算：C=a/ bX 100%式中:C一目标花粉含量，%：8——40个视野中目标花粉粒数：b——40个视野中花粉总数。N