DB37_T 1423-2009饲料中色氨酸的测定.pdf

ICS 65.120B 46DB37山东省地方标准DB37/T 1423-2009饲料中色氨酸的测定Determination of tryptophan in feedstuffs2009-12-14 发布2010-01-01 实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 1423—2009前本标准由山东农业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：农业部食品质量监督检验测试中心（济南）本标准主要起草人：张红、王文正、黎秀卿、张海松、王峰恩、秦宏伟、姜国华。 DB37/T 1423—2009饲料中色氨酸的测定1 范围本标准规定了用氨基酸自动分析仪测定饲料中色氨酸的方法。本标准适用于配合饲料、预混料、浓缩饲料和单一饲料中色氨酸含量的测定。本方法最低检出限为 10pmol。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3原理饲料中的蛋白质经碱水解后，降解成多肽和游离的色氨酸，经氨基酸自动分析仪分析测定色氨酸含量。4试剂与材料4.1除另有说明，仅使用分析纯试剂；水为GB/T 6682规定的二级水。4.2水解液：将20g氢氧化钠用5%SnC12溶解并定容至100mL，临用前配置。4.3柠檬酸钠缓冲液，pH2.2：称取柠檬酸三钠19.6g，用水溶解后加入优级纯盐酸16.5mL，硫二甘醇5.0mL，苯酚1g，加水定容至1000mL，摇匀，用G4垂熔玻璃砂芯漏斗过滤，备用。4.46mo1/L的盐酸溶液：将优级纯盐酸与水等体积混合。4.5高纯氮气：纯度99.99%。4.6 L-色氨酸，色谱纯。4.6.1标准溶液配制L-色氨酸标准溶液：准确称取L-色氨酸20.4mg用2mL2%的氢氧化钠溶液溶解，再用水定容至100mL,贮冷暗处备用，该溶液浓度为2umo1/mL：临用时用pH2.2缓冲液（4.3）稀释20倍后作标准液，浓度为 0. lumol/mL.5＇仪器5.1分析天平：精确至0.0001g。5.2 恒温干燥箱。5.3水解管：耐压硬质玻璃管，体积20～30mL，用去离子水冲洗干净并烘干。5.4酒精喷灯。5.5氨基酸自动分析仪：三酮柱后衍生离子交换色谱仪，分辨率大于90%。6试样制备取有代表性的试样，按四分法缩减至25g左右，粉碎并过0.25mm孔径筛，充分混匀后装入密闭容器中备用。 DB37/T·1423—20097 测定步骤7.1样品前处理推确称取蛋白含量在7.5～30mg的试样（约50～100mg，精确到0.0001g）于水解管中，加入5mL水解液（4.2），通高纯氮气搅动，以排除空气，再加5mL水解液冲下管壁上附着的样品。水解管马上用喷灯封口、置入110℃烘箱中水解22小时。量瓶定容至刻度。摇匀后过滤于样品瓶中，待测。7.2测定按仪器说明书，调整好仪器操作参数、洗脱用缓冲液的pH 和适当的分析程序，分别注入0.1umo1/mL色氨酸标准工作液和制备好的试样水解液，用氨基酸自动分析仪以外标法分析测定试样中色氨酸含量。8 计算样品中色氨酸W计，单位为克每百克（g/100g）表示，按公式（1）计算：×100(1)m×109式中：一样品中色氨酸的含量，单位为克每百克，g/100g;C——试样测定液中色氨酸含量，单位为微摩尔每毫升，umo1/mL;试样稀释倍数；V—水解后试样的定容体积，单位为毫升，ml；一色氨酸的分子量，为204.1;试样的质量，单位为克，g;1/50——折算成每毫升试样测定的氨基酸含量，单位为微摩尔每升，umo1/L;将试样含量由纳克折算成克的系数。10-计算结果以算术平均值表示，结果精确至小数点后两位数字。8.1精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的12%。色谱图见图1。120 100 trp 19.73880 60 40.200-20-40-60115161718192021Imin]图1 色氨酸标准溶液谱图2 DB37/T东省地方标准饲料中色氨酸的测定山东省标准化研究院印刷部印刷开本 880×1230　1/16　印张　0.5　字数　5.7千字2009年12月第一版2009年12月第一次印刷版权专有不得翻印