NY_T 3631-2020CN茶叶中可可碱和茶碱含量的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.020.01B 04NY中华人民共和国农业行业标准NY/T3631—2020茶叶中可可碱和茶碱含量的测定高效液相色谱法Determination of theobromine and theophylline in tea-High performance-liquid chromatography2020-07-27发布2020-11-01实施中华人民共和国农业农村部发布 NY/T华人民共和国农业行业标准茶叶中可可碱和茶碱含量的测定高效液相色谱法NY/T 3631—2020***中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)（邮改编码：100125网址:www, ccap )北京印剧一厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销*开本880mmX1230mm1/16印张0.75字数15千字2020年10月第1版2020年10月北京第1次印朗书号：16109·8224定价：18.00元版权专有侵权必究NY/T 3631-2020举报电话：（010 NY/T 3631—2020前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位；中国农业科学院茶叶研究所、农业农村部茶叶质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：刘新、蒋迎、周苏娟、汪庆华、马桂岑、陈利燕、张颖彬。 NY/T 3631—2020茶叶中可可碱和茶碱含量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了茶叶中可可戒、茶碳含量的高效液相色谱测定法。本标准适用于茶叶中可可碱、茶碱含量的测定。本方法可可碱的定量限为3.2mg/kg，茶碱的定量限为4.4mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件.仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8303茶费碎试样的制备及其干物质含量定3原理茶叶试样中的可可碱和茶碱用70℃热水提取·经净化，过滤定容.Cl反相液相色谱柱梯度洗脱分离，271nm波长处测定，外标法定量，4试剂和材料除非另有说明，本方法使用试剂为分析纯。水应符合GB/T6682中级水的要求，4.1乙晴(C,H,N,CAS:75-05-8)：色谱纯。4.2甲醇(CH,O.CAS，67-56-1)：色调纯，4.3甲酸(CH,O,.CAS;64-18-6)。4.4氢氧化钠(NaOH,CAS:1310-73-2)。4.5重质氧化镁（MgO,CAS；1309-48-4）：分析纯氧化镁经900C灼烧30min即为重质氧化镁储存于干燥器中，4.6可可碱(C,H,N,O;CAS83-67-0)；纯度≥98%。4.7茶藏(C,HsN,Oz，CAS;58-55-9)：纯度98%。4.8液相流动相B：取5mL甲酸（4.3)用水定容至1L，4.9标准储备溶液(1000mg/L)；分别称取可可减（4.6)0.1g(精确至0.0001g)、茶碱（4.7)0.1g(精确至0.0001g)，用甲醇(4.2)分别定容至100mL(其中可可碱标准物质可先用少量2g/L的NaOH溶液溶解）。配制好的1000mg/L的标准储各液储存于一18℃C冰箱.储存期6个月。4.10混合标准工作液：分别准确移取10μL、20μL、50μL、100μL、250μL、500μL、1000μL可可碱和1uL、2L、5μL、10μL、20μL、50μL、100μL茶碱的标准储备溶减（4.9)用水或初始流动相稀释并定容至10mL，得到一系列标准工作液（质量浓度分别为可可碱1mg/L、2mg/L、5mg/L、10mg/L、25mg/L、50mg/L,100 mg/L,和茶碱0.1 mg/L、0.2 mg/L.0. 5 mg/L、1 mg/L,2 mg/L,5 mg/L,10 mg/L),0C~5℃保存，保存期1个月。4.11微孔滤膜；孔径0.45μm，水相。5收器设备5.1高效液相色谱仪：配备紫外或二极管阵列检测器。5.2分析天平：感量0.0001g和0.001g.1 NY/T 3631—20205. 3恒温水裕锅：控温精度士1℃。5. 4离心机:≥4 000 r/min,5. 5离心管：容量50mL，5. 6容量瓶容量25mL。6试样制备茶叶样品按GB/T8303规定制备并测定干物质含量。7分析步骤7. 1提取称取0.5g(精确至0.0001g)茶叶试样于50mL离心管(5.5)中，加人1.0g重质氧化镁(MgO)，加人15mL70℃水后，置于70℃水潜中，期间不时振荡以保证料液充分接触，浸提10min，冷却至室温，4000r/min离心10min，上清液转移至25mL容