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吴茱萸多基原、多产地毒性特征变化研究 吴茱萸是一种天然的吴茱萸。 材料表面 疏毛吴两种基原和地区 Ⅰ吴茱萸 (重庆红庙村) , Ⅱ吴茱萸 (重庆合川) , Ⅲ吴茱萸 (贵州遵义) , Ⅳ石虎 (贵州松桃) , Ⅴ石虎 (湖南黄雷) , Ⅵ石虎 (湖南凉伞) , Ⅶ疏毛吴茱萸 (贵州玉屏) , Ⅷ疏毛吴茱萸 (贵州印江) , Ⅸ疏毛吴茱萸 (贵州松桃) 共3个基原9个产地, 由四川省中医药科学院资源与种植研究所舒光明研究员实地采集并鉴定。以上Ⅰ~Ⅸ号药材各取1 kg, 加水煎煮2次, 每次加水10倍, 第1次煎煮2 h, 第2次煎煮1.5 h, 滤过, 浓缩。依次得405, 499, 426, 489, 701, 679, 590, 587, 695 g浓稠药膏, 每克药膏含原生药2.47, 2.00, 2.35, 2.04, 1.43, 1.47, 1.69, 1.70, 1.44 g, -20 ℃冰箱保存。 实验动物及分组 KM小鼠, SPF级, 雌雄各半, 体重18~22 g, 由四川省中医药科学院实验动物中心提供, 许可证号SCXK (川) 2008-0019。 leica落实u2004 全自动生化测试仪 (7020型日立, 日本产) 。BMJ-Ⅲ型包埋机及病理组织包埋冷冻台 (常州市中威电子仪器有限公司) ;LEICA RM2135切片机, PHY-Ⅲ型病理组织漂烘仪 (Leica Microsystems, Germany) ;XYTX-2000新药图像彩色定量分析系统。PB302型电子天平。AST (批号0111011) , ALT (批号0211021) , TC (批号0211011) , TG (批号0311021) 均由四川省迈克科技有限责任公司提供。 方法 大鼠急性毒性试验 参照急性毒性 (半数致死量LD 制备大鼠长期毒性试验 根据吴茱萸水提取物对小鼠急性毒性试验和作者正在进行的大鼠长期毒性试验的毒性剂量, 并综合各药物提取物的特点, 每个试验样品设原生药16.67 g·kg 统计方法 计量数据用表示, 采用PEMS 3.1统计软件对各组数据进行方差分析, 进行组间比较, 结果 大鼠急性毒性试验 单次给药量大鼠有致死或未被毒性表现 Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅶ, Ⅷ, Ⅸ号样品1 d单次最大给药量动物均有毒性表现和死亡, Ⅳ, Ⅴ, Ⅵ单次最大给药量有毒性表现但未出现动物死亡, 各样品组均难以测出LD 大鼠亚急毒试验 Ⅰ~Ⅸ号药材的水提取物灌胃小鼠, 每天给药剂量为生药16.67 g·kg 肝脏组织病理学观察 Ⅰ~Ⅸ号药材的水提取物灌胃小鼠15 d后, 解剖取肝脏, 肉眼观察药物组肝脏表面颗粒略显粗糙。正常对照组小鼠肝脏指数为41.8 g·kg 讨论 石虎水提取物单次给药剂量 结果显示, 各试验组小鼠急性毒性症状基本相同;吴茱萸与疏毛吴茱萸的毒性剂量 (MTD) 无明显差别, 毒性大小与产地相关;3个产地石虎水提取物单次最大给药量小鼠均未出现死亡。可能与石虎的提取率略高, 最大给药剂量低于其他2个品种有关。至于石虎与吴茱萸, 疏毛吴茱萸急性毒性大小是否存在差异, 有待增加药材产地进一步研究, 才能更加全面的反映吴茱萸基原产地毒性特征。 肝靶器官毒性相关 临床有个案报道大剂量服用吴茱萸有剧烈腹痛、头痛、晕厥、呕吐胃内容物、视物不清、错觉、胸闷等症状 拓展吴两种药物的生物质量评价体系 从本课题组前期对吴茱萸多基原产地24个样品化学成分含量测定发现, 不同产地不同基原吴茱萸的指纹相似度差异不大, 但有效成分吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素含量均有一定的差异, 这个差异与吴茱萸品种基原无相关性, 主要与产地有关 综上所述, 吴茱萸有毒, 肝脏为其毒性靶器官之一, 其毒性大小与产地关系密切, 而与基原似无明显相关性。提示药典将吴茱萸、疏毛吴茱萸、石虎3个品种收载在吴茱萸药材项下存在一定的合理性。为了更好的说明吴茱萸多基原和产地的毒性相特征及相关性, 需再增加产地样本数, 并结合化学研究, 进一步明确吴茱萸的毒性物质基础和机制。 同时, 在中药材质量控制方面, 亦可以加入药材的生物质量评价方法, 从毒性、药效、化学成分含量多方面综合评价中药材质量的优劣 Ⅰ~Ⅸ号样品给药后, 各组样品毒性症状产生时间和恢复时间基本一致, 主要表现为怠动, 小鼠扭体运动, 呼吸急促等。怠动的发生时间一般为药后5 min~4 h;扭体运动发生时间为药后2~20 min;呼吸急促发生时间为药后5 min~4 h。动物给药4 h后动物行为活动基本恢复正常。 3.1.2 毒性剂量 3.2.1 对各局部alt的影响 药后15 d, Ⅰ, Ⅱ, Ⅶ, Ⅸ号组ALT升高, 与对照组比较有显著性差异 (P0.05或P0.01) 。其余各组ALT均有不同程度升