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纸层析的实验报告 篇一：纸层析法分离氨基酸实验报告 前言 纸层析法 纸层析法又称纸色谱法，是目前广泛应用的一 种分离技术。本世纪初俄国植物学家 M.Tswett 发现并使用这 一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。现 在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的 分离分析^p 工具之一。它是一种以纸为载体的色谱法。固 定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机 溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺 等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进 行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后 形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或 其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离 （Rf 值）与 已知样比较，进行定性。用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶 剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比色法等）。 纸层析法 （paper chromatography）是生物化学上分离、 鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的 定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、 第 1 页 共 11 页 糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种分离分析^p 工 具。纸层析法是用滤 纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附 的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。 在环境分析^p 测试中，有时用纸层析法分离试样组 分，它用于一些精度不高的分析^p ，如 3，4-苯并芘。但 不如 GC、HPLC 应用普遍。在 做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎，浸出绿色液体， 将液体与层析液（石油醚）混合，将滤纸一段进入混合液体， 四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4 条色素 带。由此观查出各种色素的相对含量和种类。 纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主 要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素 a、叶绿素b，它们在层析 液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快， 反之则慢；含量较多者色素带也较宽。最后在滤纸上留下 4 条 色素带，所以利用纸层析法 能清楚地将叶绿体中的色素分 离。 氨基酸 氨基酸是构成蛋白质的基本单位，广泛用于食 品、医药、添加剂及化妆品行业。随着生物工程技术产业的发 展逐渐成为 2l 世纪全球的主要产业之一，氨基酸的需求量越 来越大，品种变更越来越快，工艺改革越来越新。目前全世界 第 2 页 共 11 页 氨基酸每年的产量为 100 万吨，而需求总量是 800 万吨。我国 自20 世纪 60 年代起，氨基酸的应用在食品工业占 61％，在 饮料工业占 30％，医药、日用化工、农业、冶金、环保、轻 工、生物工程技术等方面占用的比例逐年增加。 氨基酸在人类生活的很多方面都有着应用： (1)在食品行业的应用 (2)在医药工业的应用 (3)在饲料添加剂行业的应用 (4)在化妆品行业的应用 (5)在农业上的应用 (6)在其他行业的应用 氨基酸工业还有着广阔的发展前景： (1)传统的氨基酸生产方法 (2)运用基因工程手段生产氨基酸 (3)大力发展药用中间体,具体为： ①氨基酸及其衍生物逐渐成为药用中间体 ②非天然氨基酸是合成活性药物的重要原料 ③生产高附加值的非天然氨基酸 一、实验目的 (1)掌握分配层析的原理，学习氨基酸纸层析法的操作技 术 （包括点样、平衡、展层、显色）。 第 3 页 共 11 页 (2)学习未知样品的氨基酸成分（水解、层析及鉴定）分 析^p 的方法。 二、实验原理 (1)纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维 上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流 动相。当有机相流过固定相时，物