DB37_T 3031-2017化妆品中斑蝥素的测定　液相色谱-质谱质谱法.pdf

ICS 71. 100. 10Y 42DB37山長东省地國方标准DB37/T3031—2017化妆品中斑螯素的测定液相色谱-质谱/质谱法Determination of cantharidin in cosmetics-LC-MS/MS method2017-10-25发布2017-11-25实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 3031—2017前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省质量技术监督局提出。本标准由山东省化妆品标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、山东省食品药品检验研究院，本标准主要起草人：周莉莉、崔玉花、高男、李丽、张卉、祝建华、邹惠玲、许士明，I DB37/T 3031—2017化妆品中斑螯素的测定液相色谱一质谱/质谱法1范围本标准规定了化妆品中班斑蟹素的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于化妆品中斑蟹素的检测。本标准液相色谱-质谱/质谱法的检出限为0.05g/kg-2原理化妆品中的斑叠素用甲醇超声提取，离心过滤，经正已烷脱脂，液相色谱-质谱/质谱法测定和确证，外标法定量。3试剂与材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。3. 1甲醇：色谱纯。3.2正已烷。3.3斑暨素标准品（cantharidin，CAS号56-25-7，C10H1204）：纯度≥99%。3.4斑素标准储备液：准确称取适量斑螯素标准品，用甲醇（4.1）溶解并定容至刻度，配制成浓度为1g/mL的标准储备液，冰箱冷藏保存。3.5标准工作溶液：将标准储备液用甲醇-水（1+9）溶液分别稀释为0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、5μg/ml、10μg/mlL、25μg/mL的系列标准溶液。冰箱冷藏保存，4仪器和设备4.1高效液相色语-质谱仪：配有电喷雾离子源，4.22分析天平：感量分别为0.0001g和0.01g。4.3j超声波清洗器。4.4凝涡混合器。4.5离心机，大于6000r/min.4.6微孔滤膜：0.22m有机相过滤膜，5测定步薪5.1样品处理称取化妆品试样1.0g（精确至0.01g）于30mL离心管中，加入5ml甲醇旋涡1分钟，超声提取10min，6000r/min离心5分钟后取上层清液。残渣加入5mlL甲醇重复提取一次，合并上清液。加入4m正已烷，振荡萃取20分钟后弃去正已烧层，从下层清液中取1.0mL于10mL刻度管中，用水定容至10mL刻度，旋 DB37/T 3031—2017涡混匀，过微孔滤膜（5.6），供液相色谱-质谱/质谱仪测定，对斑素含量较高的样品，适当稀释后进样。5. 2测定5. 2. 1液相色谱参考条件以下为液相参考条件：a) 色谱柱：C柱，1100 mx2.1 m (i. d.) , 1. 7 μm, 或相当者：b) 流动相：甲醇-水，梯度洗脱程序见表1：表1流动相梯度洗脱程序时间/in甲醇/%水/%010 0610 90 3070un1001006. 110 069010 06c)流速：0.3 nL/min:d) 柱温：30℃；e) 进样量：5μL。5. 2. 2质谱参考条件以下为质谱参考条件：a)离子源：电喷雾离子源：b) 扫描方式：负离子扫描：c) 毛细管电压：3.0kV；d) 维孔电压：35V；e) 离子源温度：110℃；f)脱溶剂气温度：450℃：g)脱溶剂气(N,)流量： 800 L/h;h)维孔气（N）流量：50L/h；i)碰撞室压力：3.0×10mbar;j)扫描方式：多反应监测（MRM）：m/z195/151（定量离子，碰撞能量12eV）、195/122（碰撞能量20eV）5. 2. 3液相色谱串联质谱测定根据试样中被测样液的含量情况，选取斑暨素的响应值在仪器线性响应范围内的浓度进行测定，如超出仪器线性响应范围应进行稀释，在上述色谱条件下斑暨素的参考保留时间为4.10min，标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图参见附录A中的图A.1。5. 2. 4液相色谱-质谱/质谱确证2 DB37/T 3031—2017按照按照液相色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液，样品中斑暨素的保留时间与标准溶液中斑整素的保留时间偏差在土2.5%之内。定量测定时采用标准曲线法测定，定性时应当与浓度相当标准工作落液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在斑盘素。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%500S~0210~2010允许的相对偏差/%±20Sz f± 30± 50结果计算和表述试样中斑螯素的含量由色谱数据处理软件或按式（1）计算获得：Y=AxcxVAs×m×1000(1)式中:Y试样中斑暨素的含量，单位为克每千克（g/kg）：A样液中斑暨素的峰面积：C标准溶液中斑蛋素的