非禽源外源病毒检测课件药典宣贯用发企业.pptVIP

当前第30页\共有45页\编于星期三\16点 当前第31页\共有45页\编于星期三\16点  4.3 荧光抗体检查法 免疫荧光技术中荧光抗体染色具有三种基本方法，即直接法(FA)、间接法(IFA)、抗补体法。最常用的是直接法和间接法。一般来说，FA法步骤少，特异性高，但敏感性较低；IFA法步骤多，非特异性相对增多，单敏感性可提高5～10倍。 荧光抗体染色常用固定剂： （1）80%或100%冷丙酮：绝大部分病毒固定使用。 （2）冷甲醇/丙酮：，配制时体积比1:1。 (3) 95%或100%乙醇：对可溶性蛋白抗原的固定,特别是切片样品。 （4）四氯化碳：较常用于病毒抗原及其它微生物抗原的固定。 （5）8－10%福尔马林：对脂多糖抗原较适合，因为这类抗原可溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。 固定时间：一般为室温5～15分钟，易失活病毒4℃ 30～60分钟，或-20℃固定12小时以上。 当前第32页\共有45页\编于星期三\16点 常见荧光素吸收波长及荧光颜色 荧光色素名称 最大发射广波长 （nm） 最大吸收峰波长 （nm） 荧光颜色 FITC 异硫氰酸荧光素 520～530 495 黄绿色荧光 RB200 罗丹明 595～600 570 桔红色荧光 TMRITC 四甲基异硫氰酸罗丹明 620 550 桔红色荧光 当前第33页\共有45页\编于星期三\16点