荧光分析技术第二章荧光信号机制演示文稿.pptVIP

基于ICT机理的ClO-荧光探针 当前第31页\共有69页\编于星期四\10点 基于ICT机理的Pd0荧光探针 当前第32页\共有69页\编于星期四\10点 基于ICT机理的GSH荧光探针 基于ICT机理的GSH荧光探针 当前第33页\共有69页\编于星期四\10点 常见用于设计ICT机制荧光探针的荧光染料有哪些？ 具有强推拉体系的荧光团，比如香豆素、萘、萘酰亚胺、苯并恶二唑、菲咪唑等。 当前第34页\共有69页\编于星期四\10点 3, 荧光共振能量转移 (FRET, Fluorescence Resonance Energy Transfer) 荧光共振能量转移指一个荧光体系含有两个荧光团，一个充当能量供体(Donor, D)，另一个为能量受体(Acceptor, A)，当用供体D的激发去激发荧光体系时，可以发生从D到A的非辐射能量转移，从而发射出受体A荧光团的荧光。 FRET发生所具备的条件： （1）能量供体荧光团D的荧光发射位于短波长处，且发射光谱和能量受体荧光团A的吸收光谱有一定重叠，能量受体能够在能量供体的发射波长处吸收能量； （2）能量供体与能量受体相隔的距离为10-100 ?。 能量传递效率： E = [(Fdonor ? Fdonor in cassette)/Fdonor] × 100% FRET荧光机制示意图 （3）供体和受体能量转移偶极子的 方向必须近似地平行。 当前第35页\共有69页\编于星期四\10点 设计FRET荧光探针的策略： （1）通过调节能量受体A的摩尔吸光系数来改变其吸收光谱与能量供体发射光谱的重叠效率，以达到调控FRET； （2）通过调节能量受体A与能量供体D之间的距离来调控FRET； （3）通过调节能量受体A的吸收波长来改变其吸收光谱与能量供体发射光谱的重叠效率，以达到调控FRET； 当前第36页\共有69页\编于星期四\10点 策略一：基于Coumarin-Rhodamine的FRET荧光探针 第一代： 基于FRET机理的Hg2+荧光探针 当前第37页\共有69页\编于星期四\10点 第二代： 基于FRET机理的Cu2+荧光探针 当前第38页\共有69页\编于星期四\10点 第三代： 基于FRET机理的Cu2+荧光探针 当前第39页\共有69页\编于星期四\10点 当前第40页\共有69页\编于星期四\10点 基于其他以Rhodamine为能量受体的FRET荧光探针 基于FITC-Rho平台的FRET pH探针 基于Nap-Rho平台的FRET pH探针 当前第41页\共有69页\编于星期四\10点 基于BOD-Rho平台的FRET Au3+探针 基于DNS-Rho平台的FRET Au3+探针 基于NT-Rho平台的FRET Au3+探针 基于QNL-Rho平台的FRET Au3+探针 当前第42页\共有69页\编于星期四\10点 以Fluorescein为能量受体的FRET荧光探针 H2O2 基于Cou-FITC平台的FRET H2O2探针 基于BOD-FITC平台的FRET Cys探针 当前第43页\共有69页\编于星期四\10点 策略二：通过调节A-D距离的FRET荧光探针 当前第44页\共有69页\编于星期四\10点 策略三：通过调节吸收波长的FRET荧光探针 基于Cou-Nap平台的FRET H2S探针 当前第45页\共有69页\编于星期四\10点 基于Cou-SBD平台的FRET Cys探针 当前第46页\共有69页\编于星期四\10点 基于FRET的荧光探针的特征？ 1，具有双荧光团；2，单激发波长和双发射带的比率信号； 3，pseudo-Stokes shift较大。 有哪些荧光团常用来设计FRET荧光探针的能量供体、受体？ 当前第47页\共有69页\编于星期四\10点 特殊情况： 增强型FRET荧光探针！ Turn-on FRET-based Cys 探针 当能量受体是一个无荧光的基团（Quencher）时，供体能量荧光被淬灭，探针无荧光；当能量受体被破坏/移除后，探针荧光恢复。 当前第48页\共有69页\编于星期四\10点 4, 共价键能量转移 (TBET, Through-Bond Energy Transfer) TBET能量体系与FRET能量体系不同，不要求能量供体的发射光谱与能量受体的吸收光谱有一定程度的重叠，它是能量供体与能量受体经过共轭键连接，将供体能量通过键直接传递到受体，但是能量供体与受体不共平面。在荧光光谱中体现为，激发能量供体，显示能量受体荧光发射峰。 FRET和TBET荧光机制示意图 TBET相比较于FRET的优势？ 1，能量供/受体的发射/吸收光谱无重叠要求；2，能量传递效率高。 当前第49页\共有69页\编