DB37_T 4010-2020含阿胶的食品中阿胶含量的测定方法.pdf

ICS 67. 050X 04DB37山長东省地方标准DB37/T4010—2020含阿胶的食品中阿胶含量的测定方法Method for determination of Ejiao content in Ejiao-containing food2020-07-09发布2020-08-09实施山东省市场监督管理局发布 DB37/T 4010—2020前 言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由青岛海关提出、归口并组织实施本标准起草单位：青岛海关技术中心、东阿阿胶股份有限公司、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：张鸿伟、周祥山、张晓梅、段小波、张峰、郭尚伟、田守生、艾连峰、架成珠徐云鹏。本标准系首次发布。I DB37/T 4010—2020含阿胶的食品中阿胶含量的测定方法1范围本标准规定了含阿胶的食品中阿胶含量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于阿胶块、阿胶糕、阿胶粉中阿胶含量的测定。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样中的阿胶经三氯乙酸分离提取，胰蛋白酵酶解，液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。4术语和定义下列术语和定义适用于本文件。4. 1阿胶马科动物驴EquusasinusL.的干燥皮或鲜皮经煎煮、浓缩制成的固体胶[中华人民共和国药典2015版一部，第189页］试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水，5.1试剂5.1.1乙睛：色谱纯。5.1.2甲酸：色谱纯。5.1.3碳酸氢铵：优级纯。5.1.4三氯乙酸：分析纯。5.1.5丙酮：分析纯。5.1. 6胰蛋白醇：序列分析纯。5.2溶液配制 DB37/T 4010—20205.2.11%碳酸氢氨溶液：称取碳酸氢铵（5.1.3）10.0g，溶于水并稀释至1000mL.5.2.230%三氯乙酸溶液：准确称取三氯乙酸（5.1.4）214.3g，溶于水并稀释至500mL。5.2.31g/mL胰蛋白酶溶液：称取1mg胰蛋白酶（5.1.6），用1%碳酸氢铵溶液1mL溶解混匀，现用现配。5.2.40.1%甲酸-水溶液：取甲酸（5.1.2）1mL，用水稀释至1000mL。5.2.50.1%甲酸-乙睛溶液：取甲酸（5.1.2）1ml，用乙（5.1.1）稀释至1000ml。5.3标准品阿胶（对照药材）。5.4标准储备落液的配制准确称取阿胶对照药材（5.3）0.10g，用1%碳酸氢铵溶液（5.2.1）超声处理溶解，再用1%碳酸氢铵溶液定容至稀释至50mL，配制成浓度为2.0mg/ml的阿胶标准储备溶液。-20℃以下避光保存，有效期3个月。5.5材料滤膜：0.22μⅢ仪器和设备6. 1液相色谱-质谱/质谱分析仪：配有电喷雾离子源（ESI）。6. 2分析天平：感量为0.01g和0.00001g.6. 3高速粉碎机。6. 4超声波仪。6.5离心机.6.6涡旋混合器。6. 7电热恒温水槽。7试样制备与保存7. 1试样的制备取出代表性样品，固体样品冷冻后经粉碎机粉碎，用四分法缩分出不少于5.0g试样，粉状样品均分成两份，每份不少于5.0g，装入清清容器内，加封后作出标记，一份作试样，一份作留样。7. 2试样的保存按照样品产品标签规定的些激条件保存，未标明些激条件的，带温避光保存8试验步骤8.1试样溶解8.1.1阿胶块、阿胶粉 DB37/T 4010—2020准确称取0.1g（精确到0.01g）试样，用水超声溶解，再用水定容至25mL8.1.2阿胶糕准确称取5.0g（精确至0.01g）试样，准确加入50mL水，超声溶解，补足重量。8.2提取精密移取2mL样品溶液，缓缓加入等体积的30%三氯乙酸溶液，充分振荡混匀，4℃静置20min，7000Xg离心5min，弃上清，用2mL冰溶丙酮洗涤沉淀，7000×g离心5min后弃丙酮清液：再用2mL冰浴丙酮重复洗涤一次，并挥干丙酮，加入1%碳酸氢铵溶液10mL～20mL超声至溶解，制得样品阿胶提取液。8. 3酶解样品阿胶提取液0.22μm滤膜过滤，取400μL滤液，加入40μL胰蛋白酶溶液，混匀，37℃恒温酶解16h，待测。8. 4标准工作曲线制备取标准储备溶液2mL，按8.2制得阿胶提取液2mL，过0.22μm滤膜，分别取滤液50、100、200、300、400μL，用1%碳酸氢铵溶液补足至400μL，即得阿胶含量分别为0.25mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL1.5mg/mL、2.0mg/mL标